大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事?麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序,目的基因大概1000bp

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/21 15:44:29

没连进去呗可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带调整下退火温度或者直接连T载体测序或者换对引物
再问：直接连T载体测序，这个怎么弄？引物是别人设计好的，所以很纠结。我们拿菌液提质粒有，只是不很多。
再答：提质粒有说明不了问题啊质粒自连了也会长的就是直接拿PCR跑胶回收产物连接T载体 T载体没有的话测序公司应该有卖或者就是按下面说的连接完酶切验证还是应该把条件改改

大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事?麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序,目的基因大概1000bp 菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带? 大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过 PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教! 革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带. 转化后挑取含有目的片段的单菌落摇菌扩增以后划盘子,几天后挑取部分菌落做PCR无带,不知是何原因? 关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来, 菌落pcr是否可以直接扩增基因组上的目的基因?单菌落需要特殊处理吗对PCR扩增后的目的基因如何进行提取怎么筛选目的基因,做PCR验证? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急