大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/17 21:03:14

大片段的RT-PCR
现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过这方面实验的帮帮忙,如果p出来,下一步用什么载体连接最好,实验室里有T3、pMD19-Tps：我的引物是经过特异性分析的,应该没什么问题,不过现在连摸索引物的Tm都无法进行.

博凌科为-为你Takara LA Taq酶,体系同说明书.反应程序是：（要求引物Tm值在70度左右,但上下只能浮动2度.Primer 5计算） No.of Cycles Temperature (℃) Duration 1 94 3 min 5 94 30 sec 72 3 min 5 94 30 sec 70 30 sec 72 3 min 25 94 30 sec 68 30 sec 72 3 min 1 72 5 min 1 4 10 min

大片段的RT-PCR现在在做RT-PCR,目的片段5500多bp,用什么样的反应体系和条件能P出来啊?..希望知道或做过做RT-PCR的时候为什么要设置标准反应体系和管家基因反应体系? 做RT-PCR的目的是什么? PCR和RT-PCR体系只有聚合酶的区别吗,缓冲液中第一链缓冲液是什么成分,做什么的. 我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门老板让做内参的条件反复做也没有要P出来的目的条带我的退火温度是55 可以大肠杆菌转化后做菌落pcr一直p不出带是怎么回事?麻烦高手指教下pcr体系及反应时的程序,目的基因大概1000bp realtime PCR 做实时荧光PCR,就用染料的那种,是不是有要求PCR的片段,一般在100BP左右? RT-PCR电泳照片做RT-PCR跑电泳时,只在一个孔中单独加了内参,其他孔中分别加了marker和目的基因,这样的照片请问做RT-PCR时,怎么根据扩增的片段长度确定dNTP的用量? 最近在做实验RT-PCR, RT-PCR做不出来我是一个新手,我现在在做反转录,在PCR,可是我扩了好几次,就是做不出什么,我排除了试剂的问题,就是 RT-PCR用什么方法做统计