革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带.

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/08 13:38:08

革兰氏阳性菌PCR
革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带.

取1ml菌液离心去培养基或者刮取少许菌苔,加入100μl无菌水混匀.EP管放入冷水中,然后开始加热,让菌液慢慢升到100℃,而不是在水已经沸腾的时候加入菌液去煮.沸腾开始后计时,十分钟后迅速放入-20℃冰箱,冷冻十分钟.取出菌液,融化后8000rpm离心1分钟,取上清作为PCR模板.因为煮沸的效率低,所以50μl的PCR体系模板最好加1.5μl-2μl.
我以前也是革兰氏阳性菌直接放入沸水煮结果P不出来,可能是因为细胞壁厚,突然受热后细菌表面形成变性层,反而保护了细菌的结构,类似于纯酒精不能消毒的原理吧.改进后都能P出来.希望对你能够有效.

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