为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/05 12:12:03

为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急
加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了

不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.
你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.
再问：我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢
再答：所以根本就没有酶切的必要。这说明你在克隆的时候PCR产物就出错了。克隆了无关序列。大小正好和你的目标序列差不多。再次PCR的时候又发生了非特异性扩增，所以产物的大小又发生了变化。你的PCR引物肯定有大问题。

为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开? 用同种限制酶切质粒和含有目的基因的DNA,用DNA连接酶连接后为什么不会出现载体-目的基因连接物这种产物? 如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆人的P53基因?并作最终鉴定. 为什么菌液PCR 引物一个载体上的一个是PCR片段上的鉴定正确后测序却完全不同?信号中断? 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! 转化后的重组子进行PCR,扩增出来的是目的基因还是整个质粒?为什么DNA测序是在转化后才进行? 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的? 如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切? 如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢