特异性引物是下游引物吗

你理解的没错.上下游引物同时用才能特异性扩增中间的那部分片段.

上游：5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游：5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件

为了形象,不写ATCG,换个比较容易看懂的形式模板是：abcd123.456efgh上游引物是：987ABCD123下游引物是：456EFGH789（这里为了方便观察下游印务给出了3’-5‘形式,通常

Tm值本来就是人为定的一个预测值,三个Tm值代表的是不同的计算方法,常用的是第三种2*AT+4GC.看退火温度时,酶切位点和保护碱基一般是不考虑在内的,因为pcr扩增时这段序列一般是不跟模板结合的,所

博凌科为-为你是这样,其实片段在一定的范围最好,为什么呢,太长了,片段多,可错配几率就很高,举个例子：两条高特异性的引物如果串成个长的引物,它的错配率不是高了一倍,但为什么说在一定范围呢,因为错配和T

先blast一下,引物特异性不好再改变条件也没意义引物GC%5‘端或中间高3’低,3’端5个碱基内尽量不要有连在一起的CG且少于3个.引物不要在串联重复区,比如Alu上如果引物没有问题,可以减少引物浓

就是指引物与该匹配的目标模板以很高程度匹配（一般是100%）,衡量值是detaG的绝对值在适度的范围较高.而此引物在基因组其他位置没有配率很高的地方,衡量水平是detaG的绝对值越小越好.这样设计出来

个人推荐使用PrimerPremier5

上游引物：GAATTCacgcgcaagattagg（后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计

不能,扩增酶扩增一定长度后会脱落,但你引物的互补链没有扩增,无法呈指数扩增,30个循环后只是扩增30倍根本没产物

不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.再问：那么我引物设计的时候，是不是以mRNA为模版与以CDNA为模版设计的引物都可以？再答：都可以，别忘

NCBI上面得到的是mRNA序列可以用oligodt反转录,也可以用与mRNA互补的特异引物来反转录再问：恩，特异性引物有一对，上游和下游，老师问我用上游还是下游，望回答具体点再答：反转录当然是下游了

不要怕软件评分只管去做就是了只要重叠的部分足够就能做出来实在不行就先做一次然后回收目的条带为模板再做一次再问：我的目的条带是1000多个bp，跑胶出来的结果才750bp左右，然后我就不知道怎么办了……

引物有一条和模版的序列相同,而另一条和模版的序列反向互补,上游和下游是自己定的,分别位于模版的两端

这个问题很简单,扩增序列应该称为目的基因,目的基因一般都上万bp,从两头开始当然不合适.PCR扩增只能扩增出上下游引物之间的序列,因为只有引物之间的DNA双链是解链状态的.你的问题说明你对基础知识掌握

一般认为Tm-5度.但是要看你的Tm计算方法,不同公司合成的引物得出的Tm都不一样,你可以做个梯度PCR看看最适退火温度,以后就有经验了.

没错,DNA的两条连是互补的,但是引物绝对不可以互补.引物是放在DNA两条连的各一端引导游离DNA上DNA链,不仅不可以互补,还要尽可能的不同.

引物二聚体跑的最快,速度超过了loadingbuffer指示剂.二聚体条带弥散,若你的目的片段和此片段有差距,基本可断定此为二聚体

ISSR标记的做法ISSR(inter-simplesequencerepeat)是Zietkeiwitcz等于与SSR标记相比,ISSR引物可以在不同的物种间通用,不像SSR标记一样具有较强

不是一回事.随机引物：我们在不知道研究目标任何信息情况下,利用合成好了的任意序列的引物（可以买得到）,可能扩增出来的产物条带数目不定;随机引物可能会在全基因组范围内有结合位点.通用引物：一般是指某基因