想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:数学作业 时间:2024/05/23 00:25:14
想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.
要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶Not I 切点;该基因将被连接到一信号肽编码序列(…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …)下游,可形成融合蛋白,上游引物的切点要满足需要.
EcoR I:GAATTC Not I:GCGGCCGC
1 acgcgcaaga ttaggtgggg cgccagagcc ggggcacctg cgcaggcttg gctgcgccct
61 ctcgcgccgc acgctctgcg ggttcctccc ttcttccgag cctctcctct ggccgccgcg
121 cgggagagag gccgagatgg cagatgagat tgccaaggct caggtcgctc ggcctggtgg
181 cgacacgatc tttgggaaga tcatccgcaa ggaaatacca gccaaaatca tttttgagga
241 tgaccggtgc cttgctttcc atgacatttc ccctcaagca ccaacacatt ttctggtgat
301 acccaagaaa catatatccc agatttctgt ggcagaagat gatgatgaaa gtcttcttgg
361 acacttaatg attgttggca agaaatgtgc tgctgatctg ggcctgaata agggttatcg
421 aatggtggtg aatgaaggtt cagatggtgg acagtctgtc tatcacgttc atctccatgt
481 tcttggaggt cggcaaatgc attggcctcc tggttaagca cgttttgggg ataattttct
541 cttctttagg caatgattaa gttaggcaat ttccagtatg ttaagtaaca cacttatttt
601 tgcctgtgta tggagagatt caagaaataa ttttaaaacc gcatacataa taaaagacat
661 tgttgcatgg cttatagtct ctctgagtgt tgcgtttgat ttgttatttt aaaaacatat
721 ttgttggaat atgtgaaggt gggtttataa ttttggatgt ttcttgcttt ttcttcccaa
781 gg
//
要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶Not I 切点;该基因将被连接到一信号肽编码序列(…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …)下游,可形成融合蛋白,上游引物的切点要满足需要.
EcoR I:GAATTC Not I:GCGGCCGC
1 acgcgcaaga ttaggtgggg cgccagagcc ggggcacctg cgcaggcttg gctgcgccct
61 ctcgcgccgc acgctctgcg ggttcctccc ttcttccgag cctctcctct ggccgccgcg
121 cgggagagag gccgagatgg cagatgagat tgccaaggct caggtcgctc ggcctggtgg
181 cgacacgatc tttgggaaga tcatccgcaa ggaaatacca gccaaaatca tttttgagga
241 tgaccggtgc cttgctttcc atgacatttc ccctcaagca ccaacacatt ttctggtgat
301 acccaagaaa catatatccc agatttctgt ggcagaagat gatgatgaaa gtcttcttgg
361 acacttaatg attgttggca agaaatgtgc tgctgatctg ggcctgaata agggttatcg
421 aatggtggtg aatgaaggtt cagatggtgg acagtctgtc tatcacgttc atctccatgt
481 tcttggaggt cggcaaatgc attggcctcc tggttaagca cgttttgggg ataattttct
541 cttctttagg caatgattaa gttaggcaat ttccagtatg ttaagtaaca cacttatttt
601 tgcctgtgta tggagagatt caagaaataa ttttaaaacc gcatacataa taaaagacat
661 tgttgcatgg cttatagtct ctctgagtgt tgcgtttgat ttgttatttt aaaaacatat
721 ttgttggaat atgtgaaggt gggtttataa ttttggatgt ttcttgcttt ttcttcccaa
781 gg
//
上游引物:GAATTCacgcgcaaga ttagg(后面可以继续加几个碱基,用PRIMER 5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KOD PLUS的话,就一般引物设计18~22个碱基,一般都能扩增出来)
下游引物:GCGGCCGCccttgggaagaaaaagc(后面可以继续加几个碱基,用PRIMER 5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同)
再问: 谢谢你,不过这个要求是什么意思啊“该基因将被连接到一信号肽编码序列(…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …)下游,可形成融合蛋白”
再答: 那要看你怎么构建载体了。 方法一:你要么通过酶切的手段,把信号肽先连入载体中,再把基因连入信号肽后。或者先把基因连入载体中,再把信号肽连入载体中。 方法二:做搭桥PCR。你搜索一下就知道了。 汗!我没有绘图的工具,以前就面对面直接手写绘图解释了,现在只能帮到你这么多。
下游引物:GCGGCCGCccttgggaagaaaaagc(后面可以继续加几个碱基,用PRIMER 5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同)
再问: 谢谢你,不过这个要求是什么意思啊“该基因将被连接到一信号肽编码序列(…NNN NNN NNN GAA TTC NNN NNN …)下游,可形成融合蛋白”
再答: 那要看你怎么构建载体了。 方法一:你要么通过酶切的手段,把信号肽先连入载体中,再把基因连入信号肽后。或者先把基因连入载体中,再把信号肽连入载体中。 方法二:做搭桥PCR。你搜索一下就知道了。 汗!我没有绘图的工具,以前就面对面直接手写绘图解释了,现在只能帮到你这么多。
想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.
想用PCR扩增下面一段序列,急求高手写出上游引物和下游引物.要求上游加EcoRⅠ酶切位点、下游加BamH I酶
高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列
PCR扩增一下序列,请写出上游引物和下游引物.
PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kca
为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗?
正向引物与反向引物在PCR中是什么作用?是不是一定都要?比如有这样一段序列,要扩增基因1,用什么正向和反向引物序列?
如果要使用PCR扩增一段已知的DNA序列,要如何设计引物
一段DNA序列为:acgttgatgcaggtg.cgtgcagaacaggct,可用于PCR扩增的引物对是:
microRNA的茎环引物及其PCR扩增的上游引物怎么设计?
若给一指定DNA序列并需要通过PCR扩增此序列,如何设计扩增引物?
PCR扩增 正向引物,反向引物是什么?怎么结合的?