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PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/12 06:12:20
PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?
设计的PCR引物都是80多分的样子,但是一旦加上酶切位点和保护碱基以后,引物的特异性就变得特别差,如何解决这种问题,有没有什么设计引物的技巧呢?
不要怕软件评分 只管去做就是了
只要重叠的部分足够 就能做出来
实在不行就先做一次 然后回收目的条带为模板再做一次
再问： 我的目的条带是1000多个bp，跑胶出来的结果才750bp左右，然后我就不知道怎么办了……
再答： 有没有试过降低退火温度 不怕麻烦就先用没有酶切位点的引物PCR一次，回收做模板，然后再PCR。 实验问题不一定都有标准的方法来解决，要靠个人，敢试敢想，祝你成功
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