已知基因中间序列,两端未知,常规PCR扩出两端序列,原理是什么?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/04/28 15:45:46
已知基因中间序列,两端未知,常规PCR扩出两端序列,原理是什么?
一对引物,dNTP,Mg2*,buffer,taq酶,cDNA
一对引物,dNTP,Mg2*,buffer,taq酶,cDNA
这个方法叫做RACE PCR,你去查一下方法吧.
再问: 我做过race,这个常规的PCR,
再答: 那就是基因在环形载体上
再问: 也不是,就是一段大概1000多bp的基因片段,已知500多bp,然后老师设计的引物,用常规PCR扩出900多bp,模版就是普通的cDNA
再答: 原来是这样。可能的原因有:
样本有基因组DNA污染,被扩增的序列含有内含子
已知的序列不准确
PCR非特异性扩增,
你把产物测序一下就知道了
下次问问题不要像挤牙膏一样
再问: 序列测了,是正确的,而且方法是老师提供的,但原理他说了没听懂,当时学长学姐在场,也没听懂,问其他老师居然也不知道,现在写论文,悲剧啊
再答: 你把序列和引物序列和位置说一下
你查一下Inverse PCR
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22065444
再问: 不太清楚,不过序列是中间部分,引物是在这段已知序列上设计的,分别在这段序列两端,当时老师说是向两端扩,没明白,不过真的扩出来了。
再问: 我做过race,这个常规的PCR,
再答: 那就是基因在环形载体上
再问: 也不是,就是一段大概1000多bp的基因片段,已知500多bp,然后老师设计的引物,用常规PCR扩出900多bp,模版就是普通的cDNA
再答: 原来是这样。可能的原因有:
样本有基因组DNA污染,被扩增的序列含有内含子
已知的序列不准确
PCR非特异性扩增,
你把产物测序一下就知道了
下次问问题不要像挤牙膏一样
再问: 序列测了,是正确的,而且方法是老师提供的,但原理他说了没听懂,当时学长学姐在场,也没听懂,问其他老师居然也不知道,现在写论文,悲剧啊
再答: 你把序列和引物序列和位置说一下
你查一下Inverse PCR
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22065444
再问: 不太清楚,不过序列是中间部分,引物是在这段已知序列上设计的,分别在这段序列两端,当时老师说是向两端扩,没明白,不过真的扩出来了。
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