用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：语文作业时间：2024/05/12 09:53:01

用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列
我做的是转基因整合位点的检测,用的是TAIL-PCR技术,做载体线性化时用的是单酶切,在距离酶切位点300-500bp处的两端我分别设计引物做TAIL-PCR,产物都在1000bp以上,侧序后刨除那300-500bp 后,剩下的碱基就应该是整合在基因组上的序列才对啊,可是还是载体上的序列（比如扩增3‘,载体上的序列指的是5’的碱基）,难道是酶切失败,还是说酶切后又自连,整个环状质粒载进去了.那如果是环状的质粒还能整合到基因组中吗?还能表达吗?
大家有没有遇到过这种情况啊?现在是一点头绪也没有啦!

我说说我的理解,仅供参考：
你本来的意图,是通过载体线性化后,外源基因与基因组同源位点的双交换,将其整合入基因组中,对吗?
如果说是整个环状质粒导入基因组,从理论上来说是有可能的,单酶切就可以了,而且概率比双酶切还要高,虽然我们一般都用线性材料转基因.
如果想验证一下是不是质粒整合进入的,我觉得既然TAIL-PCR就是做染色体步查的,如果你有时间,再往前走一段看看.
不过如果是环状整合的话,基因组有很大一段插入,从理论上是不能表达了.
再问：您好，非常感谢你的回答。载体质粒的线性化是别人做的，他告诉我是单酶切。你的意思是说有可能单酶切以后又自连接，整个环状质粒载进去，对吗？那环状质粒可以整合进基因组中吗?还是说游离在基因组外？十分期待您的回答！
再答：在第一次回答你问题的时候，我不知道为什么会整个环状质粒载进去，之所以那样说，是看你的问题，顺着你的意思的。我觉得应该有可能自连接后单交换整合进基因组中。不过我后来查了一下资料，发现除了这个解释，还有其他两种可能： 1、确实单酶切切开了，但是不是通过双交换定点整合，而是随机整合进基因组中。这个整合就不一定是在目的基因那个地方了，而且是载体片段也有可能整合进去。解决办法是利用正负筛选标记。你的TAIL-PCR之前应该是进行过正筛选的，但是有经过负筛选吗？负筛选可以杀死随机整合的细胞。 2、你做的完全正确，切开了，也定点整合了，但是你的PCR试剂有污染。要知道，PCR是很敏感的，有一点点污染就会导致错误。为了排除这种可能，你可以再做一下。我知道没有图，上面的话不太好理解，尤其是第一个。但是因为我的图是从书上看到的，所以不能展示给你。建议你从其他地方找找基因打靶或者基因敲除的图看看，应该会有类似《同源重组与随机整合细胞系的筛选示意图》的。

用TAIL-PCR扩增转基因的侧翼序列,从两端扩结果都是载体上的序列求转基因用载体pCAMBIA1300的序列 PCR扩增结果除掉载体序列后,为何出现多段目的基因? 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 请问在ncbi上blast的时候,需要去除pcr扩增引物序列吗? 高分~~急求!如果要用PCR扩增下列序列,请写出上游引物和下游引物的序列 PCR 所扩增出的DNA序列是不是只是模板DNA序列中的一部分? 知道一个基因两端的序列,中间有一段未知,用哪种PCR法把未知片段扩增出来啊? 转基因植物PCR检测,扩增条带比预期目的条带要大,对PCR扩增产物测序,结果与原序列比对同源性为60%,说明测序结果怎么找不到我的扩增引物序列? 如何在NCBI上寻找要扩增的序列? 使用PCR扩增以下DNA模版中的基因1,需要的一对引物序列是