PCR引物设计原则在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/16 07:24:33

PCR引物设计原则
在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而不适用于延伸反应.不知该如何理解呢?据我了解,引物长度只与退火温度有关,若引物较长,提高退火温度保证其与模板结合的特异性,然后调整温度到Taq酶的最适温度进行延伸反应不可以吗?
请路过的朋友们多多指教!

引物长度与延伸温度基本呈正比,还影响PCR的特异性.
延伸温度一般在酶活性温度附近,从而去调整引物长度.
引物长度的上限并不很重要,主要与反应效率有关.由于熵的原因,引物越短,它退火结合到靶DNA上形成供DNA聚合酶结合的稳定双链模板的速率越大.一般,如果扩增有一定程度不均一性的序列,则需要28~35个碱基长的寡核苷酸链作引物.
再问：可是引物长度有关的应该是退火温度吧~延伸温度貌似跟引物长度没有关系。。
再答：详见林万明著. PCR 技术操作与应用指南. 北京:人民军医出版社,1993. 第三节

PCR引物设计原则在许多地方看过这么一句话：引物长度不能过长,否则导致延伸温度大于74℃,即Taq酶的最适反应温度,因而设计PCR引物的主要原则是什么? 设计pcr体系质粒扩增扩增片段1.8kb两引物都是87碱基pfu酶怎样设计预变性变性退火延伸的时间和温度我的引物g ISSR-PCR引物的退火温度问题 PCR的引物怎样设计, rt pcr的引物设计用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度如何用PCR技术检测酵母菌?如何选择引物?变性、退火、延伸的温度设置为多少比较合适,Buffer? 引物的设计原则引物设计原则和具体步骤!原理! 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度! 上下游引物退火温度分别为47、49℃,如何设置温度梯度PCR最合适设计PCR引物时Tm温度有没有具体要求?比如说,Tm必须小于72度,或大于72度?