用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/18 11:25:19
用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度
Tm,看哪个?
Tm,看哪个?
第四项,Tm【℃】,三行分别是正义引物,反义引物和PCR产物的退火温度.
再问: 这我知道,在PCR的时候退火温度应该选哪个?
再答: 当然是看引物的了。设的时候应该让两条引物Tm值尽量接近,要是没办法选择,PCR的时候就选低一点的好了。反正我现在一般都先用54度先扩一遍,这个温度是很温和的,一般都能扩增出来。要是特异性不好,有杂带,再升高温度,要是扩不出来,再降低温度。经常软件给出来的温度实际做的时候会有出入的。
再问: 这我知道,在PCR的时候退火温度应该选哪个?
再答: 当然是看引物的了。设的时候应该让两条引物Tm值尽量接近,要是没办法选择,PCR的时候就选低一点的好了。反正我现在一般都先用54度先扩一遍,这个温度是很温和的,一般都能扩增出来。要是特异性不好,有杂带,再升高温度,要是扩不出来,再降低温度。经常软件给出来的温度实际做的时候会有出入的。
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