用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/22 05:12:00
用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而且marker没有颜色,怎么知道跑到了哪里?
首先原理差不多,具体细节差异还是有的.
跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯.
两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)
但是跑DNA一般用 TBE(Tris 、硼酸、EDTA),还含尿素
用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer.蛋白较一般有分离胶和浓缩胶.
浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯
电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳.
DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢.
跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯.
两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)
但是跑DNA一般用 TBE(Tris 、硼酸、EDTA),还含尿素
用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer.蛋白较一般有分离胶和浓缩胶.
浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯
电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳.
DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢.
用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而
western 想分开65和93kd的蛋白用多大浓度的分离胶
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