构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：化学作业时间：2024/05/03 03:17:13

构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和
已经预先双酶切的目的载体连接,那么?先前的目的基因为什么不直接和目的载体相连呢?为什么还要经过T载体这一步呢?（所用引物未使用保护碱基）,是什么原因呢?

理论上讲PCR产物可以直接酶切连接反应.
但是,以PCR产物酶切的时候没有办法证明双酶切是否成功、彻底（PCR产物会有ployA的存在必须切掉,但是PCR产物和酶切产物大小差别不大）.而以T载体为媒介,双酶切T载体,跑胶检测可以很清楚的看到酶切产物,并特异回收.

构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带! 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶构建基因表达载体时,启动子终止子是如何设计加上去的?通常说用同一种酶切割质粒和目的基因,这样可以保证连接,但是目的基因前有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 双基因载体连接需要将两个不同的基因同时连接到一个载体上,一般而言,是先将其中一个基因和载体相连,再将另一个载体和其相如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关目的基因与载体的体外连接.为什么目的基因要比载体多些? 目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,预测重组子的目的基因PCR电泳图目的基因（1.5 kb）与载体（4 kb）通过EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点连接重组,请预测重组子的目的基因PCR电泳 TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验