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双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：英语作业 时间：2024/05/04 02:50:36
双酶切老是切不完全
我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶切位点,但现在将T载体进行双酶切,缺总是切不完全,只有大约1/3的载体被切开,所以200bp的条带很淡.我的酶切体系是30ul 2种酶各1ul 然后10ul质粒,37度酶切2小时.我确定酶和buffer都没有加错,但为何老是切不下基因呢?
Best reaction for EcoRI is high slat buffer,while HindIII is low salt buffer.Many companies will tell you HindIII would not work well in high salt buffer.I would use high salt buffer,such as New England Buffer 3,for your digestion.Usually it works pretty well.Do not worry too much about HindIII,in most cases you include much much more than necessary enzyme for the restriction.
Good luck.
双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶 关于 克隆的问题.假如我有有一个基因片段,未知序列.我可以把它连接到T载体,然后PCR 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和 关于PCR克隆基因的引物问题 如果将PCR扩增的X基因片段与克隆载体连接,并转化入宿主大肠杆菌中,写出技术路线（包括基因和载体的连接、转化和鉴定）和关 普通PCR和基因克隆PCR的引物设计有什么不同和注意事项? TAKARA的PMD18-T载体可以用哪个通用引物验证?用了TAKARA的PMD18-T载体转入了目的片段,想用PCR验 关于实验中的酶切反应小弟我最近在做酶切,做的是HindIII和EcoRI的双酶切,两个酶的缓冲液不同,所以准备两次酶切, 用EcorI和SalI酶切目的基因和载体后酶连,然后转化DH5a,涂板后却不长菌,是为什么呢? 基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的 菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检