一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/13 16:53:19

一道实验设计,设计药物质粒中的表达,从目的基因筛选到蛋白质检测,
因为本人生化知识尚浅，对于这个问题还可不可以再具体一些，就是有具体的实验步骤

过程有点小复杂下面是我回答别人的问题的答案,
1.得到目的基因：设计引物（引物上带有酶切位点）→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上
2．得到目的蛋白：将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,摇菌过夜→提取质粒,进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21（DE3）菌系中→诱导表达蛋白→进行SDS-PAGE检测是否表达出正确大小目的蛋白→大量诱导→得到表达蛋白的DE3
3.纯化目的蛋白：将菌进行超声破碎→引用Ni-His结合树脂4℃结合过夜→应用不同洗液洗脱得到纯化的目的蛋白→应用BSA对蛋白含量进行定量
4.应用得到的纯化目的蛋白150mg目的蛋白+弗氏完全佐剂对兔子进行一免,以后每次应用150mg目的蛋白+弗氏不完全佐剂加强免疫2-3次（两周加强一次）→最后一次免疫10天后采血→这样就制备得到兔高免血清
5.纯化抗体（可做可不做）：应用抗体纯化试剂盒对得到的血清进行纯化,得到纯化的兔免目的蛋白的多克隆抗体

如果质粒与目的基因结合的重组DNA和不含目的基因的质粒,同时在培养基中表达,怎样区分和筛选出目的基因? 基因工程中的质粒1、目的基因拼接到质粒上后要怎么表达,不是只有核染色体中DNA才可以表达基因吗?2、如果质粒上的目的基因假如一个质粒上有一段抗生素基因,目的基因插入到这段抗生素基因的话,就难以筛选,可是,如果目的基因插入到抗生素基因意外的话有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计? 假如目的基因插入了质粒的四环素抗性基因中,筛选含目的基因的细胞,这个质粒还含有抗氨苄霉素基因. 如何从基因文库中筛选目的基因检测到标记基因所表达出来的性状,则说明受体细胞中的目的基因已成功表达这句话为什么不对? 基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤.现运用_酶切质粒,完全酶切后进行电泳观察,若出现长度为1.1k 是这样的,为什么标记基因能检测目的基因是否在成功插入到质粒上呢,如果那质粒上有抗青霉素基因,就算它没有被插入目的基因,把具有标记基因的质粒如何筛选目的基因,如何鉴别目的金银是否进入细胞中高中基因工程中抗四环素和青霉素作用,如何筛选含目的基因的质粒?