把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/17 22:43:12

把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计?
质粒酶切位点有BamHI,EcoRI,HindIII,Pstl,Smal,Xbal,Xhoi,目的基因上有BamHI,BgII,Smal,Xmal 等,重组时该选哪个限制性内切酶?怎么设计引物引物?

重组时选择你的目的基因上没有,而质粒的多克隆位点上有的酶切位点,一般重组质粒需要两个酶,所以你要选择两个酶切位点,注意尽量避免使用切出平末端的酶.重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒的多克隆位点上的排列顺序,这个不能错,不然序列就会接反.一般设计重组引物的时候,在上游引物5’端前面加上载体多克隆位点排列在前面的酶切位点序列,在下游引物5‘端前面则加上后面的一个酶切位点,酶切位点加好后,注意5’端还需要加上保护碱基,这个具体你可以去查下内切酶的说明书.然后你要注意,根据你的载体需要,是否要在引物上带上启动子和终止子.

把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计? 请问：基因工程中用两种限制性内切酶切割如何避免出现质粒与质粒、目的基因与目的基因连接. 如何将目的基因和质粒结合成重组质粒如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢? 质粒与目的基因连接得到几种重组质粒载体和目的基因分别经限制性酶切后,产生不同的3'突出粘性末端.设计实验方案,构建重组质粒. 构建基因表达载体时,启动子终止子是如何设计加上去的?通常说用同一种酶切割质粒和目的基因,这样可以保证连接,但是目的基因前重组质粒,每个限制性核酸内切酶至少插入一个目的基因使用农杆菌转换法时如何将目的基因插入到Ti质粒中的T-DNA上? 只有用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和质粒才能拼接成重组质粒,是错的为什么? 质粒构建的过程中,如果是想把α基因与A质粒重组,但为什么要先与一个B质粒先重组再构建呢? 在构建基因表达载体时候,怎么利用选择培养基鉴别是质粒—质粒,目的基因—目的基因,还是质粒—目的基因