Oryza sativa 内参基因引物

我也遇到过这种问题,个人觉得可能是目的基因的定量引物不好,还有就是要优化PCR条件!

直接在NCBI里面查找金银花的内参基因,如果没有的话,就找与金银花同种属植物的内参基因.我做过猪的,在NCBI里查不到猪的内参基因,我就用的小鼠的,因为是持家基因,所以在哺乳动物里面表达的差异不大,也

可以.定量PCR内参的选择最重要的是这个基因在不同个体之间的此组织（比如是肌肉）表达恒定.所以你需要找好了.

在这个专利文件里面有全长,引物你自己设计吧

要在生物体或细胞内稳定表达的基因才能作为PCR的内参基因,因此又名看家基因,由于在不同细胞、组织中常量表达,没有组织特异性,因此不同昆虫之间可以共同使用内参.再问：那引物是根据自己的物种去具体设计还是

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致.如果加样量是一致的,而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题.理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样.如果你能肯定加样

内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求,但realtime一般选择300bp以下它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.P

可以鉴定出两种状态下细胞总RNA样品内A基因量的差异,但这个差异包含着误差：1,总RNA量的不准确性,虽然用分光光度计计算了浓度,但实际上还是有误差的存在,对那些表达水平只差那么丁点儿的样品尤其关键；

举例说吧,想用RT分析两种不同的细胞（高氧、低氧两种条件的培养物）中A基因的表达水平,RT可以鉴定出两种状态下细胞总RNA样品内A基因量的差异,但这个差异包含着误差：1,总RNA量的不准确性,虽然用分

你说的应该是realtimePCR吧,注意RT其实是逆转录reversetranscription的缩写,和realtime一定要分开来.常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时（realtime

提交不了答案.不要调一致把内参也检测了

为啥要把内参调一致呢你每次都也检测一下内参不就好了然后用目的基因的比上内参一般很少有什么调一致的吧.

那是内参引物可能有问题,建议重新设计内参引物

因为内参和目标基因的扩增效率有可能不一样,所以CT值不能直接相减.只能是内参间先算出相对量,目的基因也算出相对量（倍数）,然后在用目的基因的倍数除以内参的倍数.再问：一共有三个内参基因，他们的几何平均

这个概念一般是用在定量PCR中.定量PCR是要检测某个基因的表达,降低或者提高,但是当你得出结果以后,你并不知道是它本身的表达降低/提高了,还是你操作过程中造成的误差（比如提RNA时的损失）,所以这个

好的内参基因应该受环境影响变化较小,否则不能作为对照与处理的内参.常用内参有actin,ubiquitin,histone等等,一般物种都有常用内参,不建议在这方面发挥.再问：看的文章里筛内参基因时怎

内参就是对照基因,在PCR中,就是肯定能用PCR扩增出来的基因,无论你要扩增什么生物,比如你做的是真菌,都可以扩的出来.阳性对照的目的,有两个：一个是帮助你判断你的PCR扩增的过程中有没有出现什么问题

不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量（CT值差）过大,用内参基因来衡量目标基因的

我不了解你的实际情况,我给你几条建议：1.可能是内参引物有问题2.你扩增内参基因的PCR条件设计可能有问题,如Tm3.你用的是一块胶吗?加核酸染料了吗?

一个一个查的：Oryzasativasspjaponicacv.Nipponbareactin：LOC_Os03g61970Oryzasativasspjaponicacv.Nipponbarealp