做westernblot 条带用双氧水孵育干什么的?

上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime

如果用的Marker有颜色,对颜色.如果是一色的,往往是最小的那个很淡看不清.

一开始的时候是叫Southernblot的,后来又出现了两个过程相似但对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个针对蛋白质,这两种技术分别被称为Northern和Western,才最终确定下来叫West

如果已知目标蛋白是什么,只要做WB就可以看了如果未知目标蛋白是什么,则需要根据与阴性对照的结果对比来判断.也就是没有加抗体,只有beads和蛋白孵育的对照组没有这个条带,而实验组有,才能说明是抗体特异

co-ip跑出来的两个蛋白,如果大小不一样,肯定是两条带的,跑WB前会让蛋白质变性,他们之间的结合不存在了跑出来粗是因为co-ip相当于一个纯化的过程,没有co-ip的样是检测一大堆蛋白里面你需要的蛋

问题很多啊.或者是你的PCR仪需要进行荧光校准（如果其他探针也没有信号的话）,已经不能收集荧光信号了.或者是你的探针本身就有问题,合成的不好,信号很弱甚至没有信号.或者是你的探针存放时间太长,存放条件

不排除是预染Marker质量又问题再问：marker没有问题，实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的，所以实验过程和仪器与他们不是很相同再答：那建议你在适当延长一下转膜的时间吧，三、四个小时

问科学家吧!

做个对照,如果酶没有问题的话.那可以降低一下退火温度或者稍微提高一下模板量再试试.

可能还是转膜的条件问题吧,我和你的抗体一样,蛮好用的,你试试摸索转膜时间吧,可以一个样品多点几个孔,隔段时间就剪一条,摸摸时间

miRNA由于太短,引物序列可优化范围很小,rt-pcr很容易有非特异性,很多引物都采用LNA来提高退火温度增加特异性.经环方法由于增加了一步特异性反转录理论上更提高了特异性,但结果可能仍不够理想.建

没有影响吧,只要戴手套,保护好自己不接触到这些有毒的物质就行.还有用到SDS的时候多带几层口罩.其他的没什么太大影响吧.

1.protein-blot之前用Bradford测一下总蛋白量,估摸一下2.做完第一次后,用photoshop软件测一下各个内参条带的光密度值,这样可以给第二次调整的时候一个参考.

那要看你的目的基因具体的来源,大小级别的特性.TAE和别的缓冲液什么的,也有些影响,还有就是胶浓度,跑胶时候的电压控制什么的.

原因很多,你是否提到了DNA,可以将你跑的DNA直接跑胶看看,到底有没有条带；PCR扩增的程序有没有问题,或者引物是否有问题,可以找个对照DNA试试,相同扩增条件下,是否扩出条带,如果扩不出来就用可能

你给的条件非常模糊,无法判断.因为PCR的反应条件与很多参数有关系.如模板浓度,引物长度及GC含量,引物浓度,dNTPs浓度,选用的taqenzyme,缓冲液的离子含量,产物大小,变性时间,退火温度及

如果引物序列,PCR体系,程序,以及所用的物种都和文献一样的话,可考虑两种情况：1.你所参考的文献真实度有待考量.2.你所提取的该物种DNA质量不好.需重新提纯.

首先,你要确定你所切下来的目标条带的分子量大小.如果切下来的片段分子量小的话（小于1kb),经常会出现看不到的情况.因为从质粒上面切下来的片段摩尔数是和质粒一致的,在分子量很小的情况下,等摩尔数的小片

总共三条带,从大到小依次是28S,18S,5S,亮度依次递减.正常情况应该是28S比18S条带亮,宽度是它的2倍,5S则很淡

题目不太清楚.你的样品是什么?会不会不纯含有其他蛋白.染色方法对不对?如果所需验证的蛋白含量很少,银染分辨率比考然高.会不会跑胶跑过头了?