酶切后直接用乙醇沉淀,然后用灭菌超纯水溶解后直接做连接会有影响吗

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/22 06:46:44

不太好,如果只做沉淀,没有酚氯仿抽提,酶可能还是有活性的.所以后面连接的时候可能会有干扰.如果能用PCR clean的试剂盒处理一下的话,就比较保险了.不然最好做酚氯仿抽提.
再问：酶切完后，我的酶切体系中还有10左右的小片段，他会对连接有影响吗？或者说影响大吗？
再答：会有一点影响的。如果这个10bp就是一个片段的话，且酶切位点合适，有可能会连入到载体中。如果一旦连入，由于这个片段很小，给宿主带来的压力小，转化后，反而会具有更高的扩增能力。在这种状态下，建议用PCR clean up的kit去做纯化。因为过一遍柱子的话，很小的片段挂不上不去的。当然，如果你连完以后，发现还不错，可以直接往下做，但如果发现连出来测序怎么都不行，就还是需要kit纯化后再连了。用PCR纯化试剂盒，比胶回收简单，不需要跑电泳回收这一步。

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