荧光PCR时ct值大于30?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/18 02:26:52

荧光PCR时ct值大于30?
现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增曲线,我的猜测是cdna含量太低导致的,引物设计使用primer 6.0 长度在200bp.
其余图片请大家移步我的空间这儿只能插入一张
逆转录体系是20ul,rna加入量是1ug,cdna加入量是5ul,没有进行稀释,使用toyobo试剂盒,之前进行过阴性实验,无二聚体形成,引物设计使用primer6.

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来的产物100%是引物了.
再有,你的扩增曲线问题,CT太了,一般做定量认为CT=25时,是一个模板扩出来的,所以当大于25扩出来的结果都不可信.
还有,你反转录的时候RNA加多少,2微克?,反转录体系是多少,20微升?反转录之后按照多少比例稀释,1比4?
总之,问题可以再问详细一点,也可以直接HI我
如果做过NTC那溶解峰就没问题了,而且都很单一,特异性蛮好的.没稀释的cDNA做的定量,CT大于30?你P的什么基因呢,表达量也太低了吧,内参的CT呢,也是这么低吗

荧光PCR时ct值大于30? 定量pcr CT请问做荧光定量PCR时,CT值的结果在30左右,而不是20-25之间,这样的结果可信吗荧光定量PCR检测时的CT值怎么确定的请问：做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么? 荧光定量pcr中关于阈值的设置是否会影响Ct值? 请问：实时荧光PCR进行SNP检测时,基因分型电脑可以直接出结果吗?还是要根据Ct值等来人工分析? 我做荧光定量pcr taqman 探针,标准曲线不好,ct值没有按等差数列增加,怎么办? 请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右我想问一下荧光定量PCR法用2-△△Ct计算相对定量时结果的标准差是如何计算的我想问一下荧光定量PCR法用2-△△Ct计算相对定量的问题荧光定量数据处理时内参的CT值低于目的基因的CT值,那应该怎么进行处理啊? real-time PCR中内参基因的CT值