请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/09 11:46:16
请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右
看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?
再问: 不知道,我是个新手什么都不懂
再答: 那么童鞋,你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来滴。。。 Tm是DNA融化温度,就是双链打开成为单链的温度。跟引物序列中的GC含量有关,也受到你反应溶液中引物浓度和盐浓度的影响。在这个网站输入引物序列以后可以查到: http://frodo.wi.mit.edu/primer3/ 两个引物Tm差太多,或者PCR程序设置的Ta 温度不对应引物Tm, 都会导致PCR反应效率降低。而你的看家基因和目的基因引物有可能Tm不一样,那么同时反应,结果不能很好地代表真实表达量。如果问题是在这里,解决办法是重新设计看家基因的引物。 以上全部假设你的引物对在其他指数上没有问题。如果你的引物对本身设计得就不好,那也有可能造成你所遇到的问题,解决办法还是重新设计。
再问: 不知道,我是个新手什么都不懂
再答: 那么童鞋,你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来滴。。。 Tm是DNA融化温度,就是双链打开成为单链的温度。跟引物序列中的GC含量有关,也受到你反应溶液中引物浓度和盐浓度的影响。在这个网站输入引物序列以后可以查到: http://frodo.wi.mit.edu/primer3/ 两个引物Tm差太多,或者PCR程序设置的Ta 温度不对应引物Tm, 都会导致PCR反应效率降低。而你的看家基因和目的基因引物有可能Tm不一样,那么同时反应,结果不能很好地代表真实表达量。如果问题是在这里,解决办法是重新设计看家基因的引物。 以上全部假设你的引物对在其他指数上没有问题。如果你的引物对本身设计得就不好,那也有可能造成你所遇到的问题,解决办法还是重新设计。
请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右
定量pcr CT请问做荧光定量PCR时,CT值的结果在30左右,而不是20-25之间,这样的结果可信吗
荧光定量数据处理时内参的CT值低于目的基因的CT值,那应该怎么进行处理啊?
我准备做定量PCR,需要检测的基因大约有10个左右,请问我需要多少个内参基因?只用1个内参行不行?
我现在要做荧光定量PCR,有3个目的基因,以ACTIN基因作为内参,分析其在根茎、根、茎、叶的表达情况,
请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么?
real-time PCR中内参基因的CT值
我要用CT法做荧光定量PCR,请问需要做标准曲线吗?关于浓度,是不是在反转录时将RNA浓度调一致?
Real time pcr目的基因Ct值相差1,内参差不多是怎么回事?做了2次都这样,不想是加样的问题
实时定量pcr的CT值在什么范围内算作合理
请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确?
内参基因与目的基因的Ct值相差很大是什么原因