不同阶段的荧光定量实验都需要做目的基因及内参基因的标准曲线吗

不同阶段的荧光定量实验都需要做目的基因及内参基因的标准曲线吗 ,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出 我现在要做荧光定量PCR,有3个目的基因,以ACTIN基因作为内参,分析其在根茎、根、茎、叶的表达情况, 第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来 请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右 请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确? 荧光定量数据处理时内参的CT值低于目的基因的CT值,那应该怎么进行处理啊? 荧光定量PCR相对定量,目的基因引物浓度不同,b-action需要以不同浓度扩增2次吗? 我准备做定量PCR,需要检测的基因大约有10个左右,请问我需要多少个内参基因?只用1个内参行不行? 荧光定量pcr扩得出目的基因但是检测不到内参gapdh 请问做荧光定量PCR时每次都需要做标准曲线吗? 还想再向您请教下 关于荧光定量PCR 相对定量内参基因的选择,如果我想用18SrRNA,我该怎么得到这个内参呢