第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 03:48:09

第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来
目的基因的溶解曲线基本没有,模板浓度已经从10倍稀释,到倍稀释,到2倍稀释了.目的基因还是跑不出来,内参基本都差不多,但荧光值都不是很高.

问题有可能如下：
1）模板制备有问题.你可以用普通PCR扩增,然后电泳确定是不是模板有问题?
2）引物问题：引物设计的好与否,对Realtime 结果至关重要!可以用普通PCR确定你的引物扩增效率如何?模板可以选取一个阳性质粒当模板.
3） Realtime 体系配置出问题：好好想一下,该加的东西都加了没?模板、染料、taq酶、等.
并且各个试剂的量一定要确定没问题!
4）程序设置：仪器的程序设置,plate的编排、退火温度、等等.

第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来 ,第一次做荧光定量PCR,内参基因可以跑出来,但是荧光峰度比较低,溶解曲线也不错,但目的基因完全跑不出荧光定量pcr扩得出目的基因但是检测不到内参gapdh 不同阶段的荧光定量实验都需要做目的基因及内参基因的标准曲线吗请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确? 为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了我现在要做荧光定量PCR,有3个目的基因,以ACTIN基因作为内参,分析其在根茎、根、茎、叶的表达情况, 请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右请教做染料法荧光定量PCR,熔解曲线分析,如何区分目的基因产物和引物二聚体呢? 我也想做荧光定量,但是我想比较两株乳酸乳球菌的乳酸脱氢酶基因的表达量的差异,不知道分别拿这两株的16S做内参行么? RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? 做荧光定量PCR,但是不知道内参的序列,如果NCBI上没有该怎么设计内参的引物呢?