作业帮检测生物组织中的糖类 蛋白质 和脂肪的实验 要求有详细实验步骤和注意事项还有实验现象
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：化学作业 时间：2024/04/28 14:23:33
检测生物组织中的糖类 蛋白质 和脂肪的实验 要求有详细实验步骤和注意事项还有实验现象
1.总糖测定原理：多糖经热稀盐酸彻底水解后转化成还原糖,还原糖可用费林氏容量法定量,以此计算出样品中总糖含量.
1 试剂 浓盐酸：密度1.18g/mL.氢氧化钠溶液：6mol/L.
费林氏试剂
A液：溶解69.28g五水合硫酸铜（GB 665,CuSO4·5H2O）于水中,定容至1000mL,过滤后备用.
B液：溶解346g酒石酸钾钠（GB 1288,NaKC4H4O6·4H2O）和100g氢氧化钠（4.1）于水中,定容至1000mL,过滤后备用.
葡萄糖标准溶液：精确称取烘干的葡萄糖1.0000g,精确到0.0001g,用水溶解,加入5mL浓盐酸,再以水配制成10g/L浓度溶液定容至1000mL,成为1g/L浓度溶液.
次甲基蓝（HG B33 94）指示液：10g/L.
实验步骤
1 称样和水称取0.25g试样,精确到0.0001g,小心地倒入圆底烧瓶中,加100mL水和10mL浓盐酸.烧瓶瓶口插上回流用的玻璃管,置100℃沸水浴上水解3h.冷却后过滤.滤渣用100mL水无损地洗回到圆底烧瓶中,再加酸10mL,重复上述操作.合并两次过滤液,用6mol/L氢氧化钠溶液调节pH至 中性（用pH纸测试）,适当加热浓缩后定容至250mL. 2 费林氏液的标定：准确吸取费林氏A液和B液各5mL于 250mL锥形瓶中,混匀,加玻璃珠数粒,置于石棉网上加热.快速从滴定管中放入葡萄糖标准溶液49mL,调节温度,使之在2min内沸腾,保持微沸2min,期间加入次甲基 蓝指示液3滴；随后逐滴加入葡萄糖标准溶液,直至蓝色褪尽.滴定过程须在3min总沸腾时间内完成.10mL费林氏混合液需耗葡萄 糖标准溶液50mL左右.该滴定值为所配制的费林试剂标定值.在大批样品测定时,可将A、B液等体积混合后标定和使用,混合液保存不宜超过一个月.
3 试样液的滴定：250mL锥形瓶中加入费林A、B液各5mL,混匀,再加入试样液10～20mL,加玻璃珠数粒,置于石棉网上加热.在正式滴定前, 应先用一份试样进 行粗滴定,一边加热一边逐滴加入葡萄糖标准液,确定出试样液大致耗糖体积.正式滴定时,锥形瓶加热后应快速从滴定管中放出比实际少1mL左右的葡萄糖标准液,其他操作同费林氏液的标定.
结果计算
总糖（％）=〔（V0-V1）×0.001×250]/V2×m×（1-X）〕×100
式中：V0── 10mL费林氏混合液耗葡萄糖标准液的体积,mL；
V1── 试样液滴定时耗葡萄糖标准液的体积,mL；
V2── 试样液吸取体积,mL；
m── 试样的质量,g；
0.001── 1mL葡萄糖标准液中葡萄糖质量,g；
250── 两次水解液合并后定容的体积,mL；
X── 样品含水量,％.
2.蛋白质测定原理 蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量. 1. 有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,硝化生成（NH4）2SO4 反应式为： 2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04 （其中CuSO4做催化剂） 2. 在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中 反应式为: (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O 3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量 反应式为： (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制. 硫酸铜. 硫酸钾. 硫酸. 2%硼酸溶液. 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合.也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合. 40%氢氧化钠溶液. 0.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液. 操作方法 1、 样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg）,移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上,小火加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5小时.取下放冷,小心加20ml水,放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验. 2、 按图装好定氮装置,于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水. 3、 向接收瓶内加入10ml
2%硼酸溶液及混合指示剂1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞.将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯,提起玻璃塞使其缓慢流入反应室,立即将玻璃盖塞紧,并加水于小玻璃杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏,蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min.移动接收瓶,使冷凝管下端离开液皿,再蒸馏1min,然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶,以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点. 同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作. 计算 X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100% X：样品中蛋白质的百分含量,g； V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml； V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,ml； N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度； 0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m：样品的质量（体积）,g（ml）； F：氮换算为蛋白质的系数.蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30. 注意事项 （1） 样品应是均匀的.固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀. （2） 样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上.万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低. （3） 硝化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入30%过氧化氢（H2O2）2-3ml,促使氧化. （4） 在整个消化过程中,不要用强火.保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失. （5） 如硫酸缺少,过多的硫酸钾会引起氨的损失,这样会形成硫酸氢钾,而不与氨作用.因此,当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时,要增加硫酸的量. （6） 加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点,硫酸铜为催化剂,硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂. （7） 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色.如果没有溴甲酚绿,可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液. （8） 氨是否完全蒸馏出来,可用PH试纸试馏出液是否为碱性. （9） 吸收液也可以用0.01当量的酸代表硼酸,过剩的酸液用0.01N碱液滴定,计算时,A为试剂空白消耗碱液数,B为样品消耗碱液数,N为碱液浓度,其余均相同. （10） 以硼酸为氨的吸收液,可省去标定碱液的操作,且硼酸的体积要求并不严格,亦可免去用移液管,操作比较简便. （11） 向蒸馏瓶中加入浓碱时,往往出现褐色沉淀物,这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应,生成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀.有时铜离子与氨作用,生成深l蓝色的结合物[Cu(NH3)4]2+ （12） 这种测算方法本质是测出氮的含量,再作蛋白质含量的估算.只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量.3.脂肪的测定原理：将试样与盐酸溶液一同加热进行水解,使结合或包藏在组织里的脂肪游离出来,再用乙醚和石油醚提取脂肪,回收溶剂,干燥后称量,提取物的重量即为脂肪含量.操作方法 (1)水解 称取一定量样品于试管中,加入10m1盐酸,混匀.将试管放入70-80℃水浴中,每5-10分钟用玻璃棒搅拌一次,至样品脂肪游离消化完全为止,约需40-50分钟.（2）提取 取出试管,加入10ml乙醇,混合,冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中,用25mL乙醚分次洗试管,一并倒入量筒中,待乙醚全部倒入量筒后,加塞振摇1分钟,小心开塞放出气体,再塞好,静置12分钟,小心开塞,用石油醚一乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪.静置10-20分钟,待上部液体清晰,吸出上清液于已恒重的锥形瓶内,再加5ml乙醚于具塞量筒内,振摇,静置后,仍将上层乙醚吸出,放入原锥形瓶内.(3)回收溶剂、烘干、称重 将锥形瓶于水浴上蒸干后,置100 -105℃烘箱中干燥2小时,取出放入干燥器内冷却30分钟后称量,并重复以上操作至恒重.结果计算脂肪（%）=（m2-m1）/m×100%式中：m2 锥形瓶和脂类质量,g; m1 空锥形瓶的质量,g;m 样品的质量 ,g
1 试剂 浓盐酸：密度1.18g/mL.氢氧化钠溶液：6mol/L.
费林氏试剂
A液：溶解69.28g五水合硫酸铜（GB 665,CuSO4·5H2O）于水中,定容至1000mL,过滤后备用.
B液：溶解346g酒石酸钾钠（GB 1288,NaKC4H4O6·4H2O）和100g氢氧化钠（4.1）于水中,定容至1000mL,过滤后备用.
葡萄糖标准溶液：精确称取烘干的葡萄糖1.0000g,精确到0.0001g,用水溶解,加入5mL浓盐酸,再以水配制成10g/L浓度溶液定容至1000mL,成为1g/L浓度溶液.
次甲基蓝（HG B33 94）指示液：10g/L.
实验步骤
1 称样和水称取0.25g试样,精确到0.0001g,小心地倒入圆底烧瓶中,加100mL水和10mL浓盐酸.烧瓶瓶口插上回流用的玻璃管,置100℃沸水浴上水解3h.冷却后过滤.滤渣用100mL水无损地洗回到圆底烧瓶中,再加酸10mL,重复上述操作.合并两次过滤液,用6mol/L氢氧化钠溶液调节pH至 中性（用pH纸测试）,适当加热浓缩后定容至250mL. 2 费林氏液的标定：准确吸取费林氏A液和B液各5mL于 250mL锥形瓶中,混匀,加玻璃珠数粒,置于石棉网上加热.快速从滴定管中放入葡萄糖标准溶液49mL,调节温度,使之在2min内沸腾,保持微沸2min,期间加入次甲基 蓝指示液3滴；随后逐滴加入葡萄糖标准溶液,直至蓝色褪尽.滴定过程须在3min总沸腾时间内完成.10mL费林氏混合液需耗葡萄 糖标准溶液50mL左右.该滴定值为所配制的费林试剂标定值.在大批样品测定时,可将A、B液等体积混合后标定和使用,混合液保存不宜超过一个月.
3 试样液的滴定：250mL锥形瓶中加入费林A、B液各5mL,混匀,再加入试样液10～20mL,加玻璃珠数粒,置于石棉网上加热.在正式滴定前, 应先用一份试样进 行粗滴定,一边加热一边逐滴加入葡萄糖标准液,确定出试样液大致耗糖体积.正式滴定时,锥形瓶加热后应快速从滴定管中放出比实际少1mL左右的葡萄糖标准液,其他操作同费林氏液的标定.
结果计算
总糖（％）=〔（V0-V1）×0.001×250]/V2×m×（1-X）〕×100
式中：V0── 10mL费林氏混合液耗葡萄糖标准液的体积,mL；
V1── 试样液滴定时耗葡萄糖标准液的体积,mL；
V2── 试样液吸取体积,mL；
m── 试样的质量,g；
0.001── 1mL葡萄糖标准液中葡萄糖质量,g；
250── 两次水解液合并后定容的体积,mL；
X── 样品含水量,％.
2.蛋白质测定原理 蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量. 1. 有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4 作用下,硝化生成（NH4）2SO4 反应式为： 2NH2+H2S04+2H＝(NH4)2S04 （其中CuSO4做催化剂） 2. 在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中 反应式为: (NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O 3. 用已知浓度的H2SO4（或HCI）标准溶液滴定,根据HCI消耗的量计算出氮的含量,然后乘以相应的换算因子,既得蛋白质的含量 反应式为： (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O＝(NH4)2SO4+4H3BO3 (NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3 试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制. 硫酸铜. 硫酸钾. 硫酸. 2%硼酸溶液. 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合.也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合. 40%氢氧化钠溶液. 0.025mol/L硫酸标准溶液或0.05mol/L盐酸标准溶液. 操作方法 1、 样品处理：精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg）,移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中,加入0.2g硫酸铜,6g硫酸钾及20毫升硫酸,稍摇匀后于瓶口放一小漏斗,将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上,小火加热,待内容物全部炭化,泡沫完全停止后,加强火力,并保持瓶内液体微沸,至液体呈蓝绿色澄清透明后,再继续加热0.5小时.取下放冷,小心加20ml水,放冷后,移入100ml容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶,洗液并入容量瓶中,再加水至刻度,混匀备用.取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸同一方法做试剂空白试验. 2、 按图装好定氮装置,于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入数粒玻璃珠以防暴沸,用调压器控制,加热煮沸水蒸气发生瓶内的水. 3、 向接收瓶内加入10ml
2%硼酸溶液及混合指示剂1滴,并使冷凝管的下端插入液面下,吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室,并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内,塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞.将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯,提起玻璃塞使其缓慢流入反应室,立即将玻璃盖塞紧,并加水于小玻璃杯以防漏气.夹紧螺旋夹,开始蒸馏,蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内,蒸馏5min.移动接收瓶,使冷凝管下端离开液皿,再蒸馏1min,然后用少量水冲洗冷凝管下端外部.取下接收瓶,以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点. 同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作. 计算 X =(（V1-V2）*N*0.014)/( m*（10/100）) *F*100% X：样品中蛋白质的百分含量,g； V1：样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml； V2：试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积,ml； N：硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度； 0.014：1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m：样品的质量（体积）,g（ml）； F：氮换算为蛋白质的系数.蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%,按16%计算乘以6.25即为蛋白质,乳制品为6.38,面粉为5.70,玉米、高粱为6.24,花生为5.46,米为5.95,大豆及其制品为5.71,肉与肉制品为6.25,大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83,芝麻、向日葵为 5.30. 注意事项 （1） 样品应是均匀的.固体样品应预先研细混匀,液体样品应振摇或搅拌均匀. （2） 样品放入定氮瓶内时,不要沾附颈上.万一沾附可用少量水冲下,以免被检样消化不完全,结果偏低. （3） 硝化时如不容易呈透明溶液,可将定氮瓶放冷后,慢慢加入30%过氧化氢（H2O2）2-3ml,促使氧化. （4） 在整个消化过程中,不要用强火.保持和缓的沸腾,使火力集中在凯氏瓶底部,以免附在壁上的蛋白质在无硫酸存在的情况下,使氮有损失. （5） 如硫酸缺少,过多的硫酸钾会引起氨的损失,这样会形成硫酸氢钾,而不与氨作用.因此,当硫酸过多的被消耗或样品中脂肪含量过高时,要增加硫酸的量. （6） 加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点,硫酸铜为催化剂,硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂. （7） 混合指示剂在碱性溶液中呈绿色,在中性溶液中呈灰色,在酸性溶液中呈红色.如果没有溴甲酚绿,可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液. （8） 氨是否完全蒸馏出来,可用PH试纸试馏出液是否为碱性. （9） 吸收液也可以用0.01当量的酸代表硼酸,过剩的酸液用0.01N碱液滴定,计算时,A为试剂空白消耗碱液数,B为样品消耗碱液数,N为碱液浓度,其余均相同. （10） 以硼酸为氨的吸收液,可省去标定碱液的操作,且硼酸的体积要求并不严格,亦可免去用移液管,操作比较简便. （11） 向蒸馏瓶中加入浓碱时,往往出现褐色沉淀物,这是由于分解促进碱与加入的硫酸铜反应,生成氢氧化铜,经加热后又分解生成氧化铜的沉淀.有时铜离子与氨作用,生成深l蓝色的结合物[Cu(NH3)4]2+ （12） 这种测算方法本质是测出氮的含量,再作蛋白质含量的估算.只有在被测物的组成是蛋白质时才能用此方法来估算蛋白质含量.3.脂肪的测定原理：将试样与盐酸溶液一同加热进行水解,使结合或包藏在组织里的脂肪游离出来,再用乙醚和石油醚提取脂肪,回收溶剂,干燥后称量,提取物的重量即为脂肪含量.操作方法 (1)水解 称取一定量样品于试管中,加入10m1盐酸,混匀.将试管放入70-80℃水浴中,每5-10分钟用玻璃棒搅拌一次,至样品脂肪游离消化完全为止,约需40-50分钟.（2）提取 取出试管,加入10ml乙醇,混合,冷却后将混合物移入100ml具塞量筒中,用25mL乙醚分次洗试管,一并倒入量筒中,待乙醚全部倒入量筒后,加塞振摇1分钟,小心开塞放出气体,再塞好,静置12分钟,小心开塞,用石油醚一乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪.静置10-20分钟,待上部液体清晰,吸出上清液于已恒重的锥形瓶内,再加5ml乙醚于具塞量筒内,振摇,静置后,仍将上层乙醚吸出,放入原锥形瓶内.(3)回收溶剂、烘干、称重 将锥形瓶于水浴上蒸干后,置100 -105℃烘箱中干燥2小时,取出放入干燥器内冷却30分钟后称量,并重复以上操作至恒重.结果计算脂肪（%）=（m2-m1）/m×100%式中：m2 锥形瓶和脂类质量,g; m1 空锥形瓶的质量,g;m 样品的质量 ,g
检测生物组织中的糖类 蛋白质 和脂肪的实验 要求有详细实验步骤和注意事项还有实验现象
生物 在检测生物组织中的糖类,脂肪和蛋白质实验中,实验材料的选择
下列关于“检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质”实验操作步骤的叙述中，正确的是（ ）
求检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质的实验结果实验数据现象分析实验结论影响实验结果的因素
在检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质的实验中,鲜肝是用来干什么的?
检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 的实验报告
我们要求写实验报告,生物实验报告：检验生物组织中的糖类,脂肪和蛋白质
高一生物学习“检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质”总结三个实验所用的试剂及用量和实验现象、原理
请老师按步骤写一份详细的实验报告，谢谢老师！题目：检测生物组织中的糖类，脂肪和蛋白质一，实验目的： 实验原理：二，材料选
18页 检测生物组织中得糖类、脂肪和蛋白质.实验材料选取有什么要求?
有关生物必修一检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质的实验结论的空
检测生物组织中糖类脂肪蛋白质的实验原理