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请解释一下如何用半定量PCR检测基因的表达量,要详细的过程和这么做的原因,

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/16 14:47:16
请解释一下如何用半定量PCR检测基因的表达量,要详细的过程和这么做的原因,
情况是这样,我知道首先需要通过调内参基因到相同亮度来确定反应物的量,然后呢,怎么测出这个基因在不同胁迫条件下的表达量,那个表达量的图是根据什么画出来的,
我觉得你做一个实时定量吧……半定量现在谁还用啊.你要是有荧光定量PCR,就自己做.没有就送出去公司做,你要想学自己跟过去在公司看着他做.半定量多半是终点定量,重复性不好,也不是很准(话说定量PCR也有不少问题,不过最起码比半定量好).
你如果要做半定量,首先要把RNA浓度调到比较一致.内参的存在虽然可以一定程度矫正浓度的误差,不过那也是在quantity one这类图像分析软件里看的,还是可能会有人为不可避免的差别.(话说半定量有好多种设计策略,什么竞争性、非竞争性,我不知道你是不是把内参引物和目的基因引物拿到一个管子里P,或者是分开P)
最后表达量图画法很简单,你就拿你的每一个体的目的基因的丰度值减去自身内参基因的丰度,然后选则一个个体作为标准,用excel画柱状图就行了.