作业帮计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数指的是哪个的稀释倍数?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：生物作业 时间：2024/05/13 16:44:38
计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数指的是哪个的稀释倍数?
是指挑菌接种1：100的那个比例吗?
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
我用的是CaCl2法制备的
是指挑菌接种1：100的那个比例吗?
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
我用的是CaCl2法制备的
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下：
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
转化频率（转化子数／每ug 质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA 加入量(ug)
下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下：
第一天,上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板（一般要48小时以上才能长出单克隆 ）
第三天,在长有单克隆的平板上挑一个生长状态好的单克隆接到4ML新鲜培养基,过夜培养
第四天,如你说的,按1：100扩大培养；OD达到0.5-0.6开始制备感受态细胞
制备好的感受态细胞分装到1.5EP管中,一般为100UL每管
感受态效价的测定：
转0.1ng标准质粒到100ul的感受态细胞中----1.5KV电压电击----37度培养1小时----稀释 涂布
所谓的“稀释倍数”是指这的稀释
一般情况下TG1电转感受态的效价（即转化频率）在10^8--10^9
所以反推预测,我们一般会稀释10^-2---10^-3梯度来涂布.
如果涂布50ul,假设在10^-2板上N个菌落,
套公式：
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
转化子总数＝N×10^2×100/50＝2N×10^2
转化频率（转化子数／每ug 质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA 加入量(ug)
转化频率＝2N×10^2/10^-4(0.1ng=10^-4ug)
＝2N×10^6
你自己推算一遍,如果在10^-3板上Y个菌落的转化频率是否为2Y×10^7.
一样的,只不过是不同方法制备的感受态细胞,一个是电转感受态,你的是化转感受态.计算方法还是相同地.
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
转化频率（转化子数／每ug 质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA 加入量(ug)
下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下：
第一天,上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板（一般要48小时以上才能长出单克隆 ）
第三天,在长有单克隆的平板上挑一个生长状态好的单克隆接到4ML新鲜培养基,过夜培养
第四天,如你说的,按1：100扩大培养；OD达到0.5-0.6开始制备感受态细胞
制备好的感受态细胞分装到1.5EP管中,一般为100UL每管
感受态效价的测定：
转0.1ng标准质粒到100ul的感受态细胞中----1.5KV电压电击----37度培养1小时----稀释 涂布
所谓的“稀释倍数”是指这的稀释
一般情况下TG1电转感受态的效价（即转化频率）在10^8--10^9
所以反推预测,我们一般会稀释10^-2---10^-3梯度来涂布.
如果涂布50ul,假设在10^-2板上N个菌落,
套公式：
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
转化子总数＝N×10^2×100/50＝2N×10^2
转化频率（转化子数／每ug 质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA 加入量(ug)
转化频率＝2N×10^2/10^-4(0.1ng=10^-4ug)
＝2N×10^6
你自己推算一遍,如果在10^-3板上Y个菌落的转化频率是否为2Y×10^7.
一样的,只不过是不同方法制备的感受态细胞,一个是电转感受态,你的是化转感受态.计算方法还是相同地.