为什么提取质粒测出来OD值了,跑胶没有条带?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/16 05:45:47

只要制备胶等过程都没问题,marker也跑出条带了,那这种情况最有可能的原因还是质粒的浓度过低.所以,虽然OD值可测出来,但胶显示不出来,我就遇到过这样的情况,还算很普通的现象.下次再加大菌量就行.
再问：我们是自己配的试剂，没有用试剂盒，那你一般跑胶上样多少体系？
再答：一般高拷贝质粒一般上样5ul就足够了，在加1ul6*loading buffer.量够的话，1~3ul都能跑出条带。我觉得与上样体系关系不大，具体的我在举几种情况吧。 1. 如果你加大菌量还没提出来，也许你的质粒是低拷贝的质粒。一般高拷贝质粒象PUC质粒通常5mL菌就差不多能提出来，但像PBI121这样低拷贝的质粒就需要加大菌量。菌量多大呢？至少20mL试试吧。像我现在因为质粒用量大，每次一提就是80mL菌量呢。当然一定注意菌量加大，溶液I、II、III一定要相应增大量。建议：提质粒时，可以顺便提一个高拷贝的质粒作为对照，验证提取体系的试剂、操作等。 2. 如果对照质粒提出来了，而加大菌量还没提出来，那么最有可能要从菌上入手。最好使用冻存的菌重新活化再试试。如果菌在冰箱中放的太久，不排除影响质粒的表达。还有就是细节的问题，比如菌培养的时间是不是超过18小时，已经到了菌生长的衰亡期，这会影响质粒的表达。甚至培养前加的抗生素过没过效。这些虽是细节，但会影响整个实验的成败。

为什么提取质粒测出来OD值了,跑胶没有条带? RNA提取后OD值及浓度都好为什么电泳未见条带啊菌液pcr可以拉出目的条带,但是质粒抽出来酶切结果说是没有插进去,为什么? 细菌基因组提取,电泳后为什么跑出来3条带? 我提取的DNA电泳后,条带很暗,而自外检测OD值在正常范围内,上样量为2ul,请问为什么摇菌后提取质粒,在菌液OD值为多少时最佳为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了 CTAB法提取水果DNA时,可以看到清晰的RNA条带,但是DNA没有条带,为什么? 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀重组质粒不进行双酶切直接跑胶,条带应该是多少? 为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了地震,为什么没有提前测出来呢?