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我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门 老板让做内参的条件 反复做也没有要P出来的目的条带 我的退火温度是55 可以

来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：综合作业 时间：2024/05/15 18:55:24
我做的RT-PCR
怎么样让内参一致?刚入门 老板让做内参的条件 反复做也没有要P出来的目的条带 我的退火温度是55 可以的 但是用这个条件去P 其他的样就P不出来 应该怎么办?
楼上的大哥,我的神啦,内参如果不是用同样退火温度,不是跟被测基因同时p的话,还好叫内参的吗?
不过这得怪楼主没有说清楚,RT是反转录还是说real time的定量PCR啦?
如果是反转录的话,好像是叫loading control 而非internal control啊．．．用cDNA做个半定量的PCR实在很少见过这个出问题的.楼上说不必用相同退火温度也是没错,但是所谓p出loading control的量来调整模板的量还真是神奇的说法,普通PCR没办法定量啊.看到条带暗你就去加多模板?加多少你知道么?
如果是real time,你需要好好去计算下所有引物的退火温度,到底是不是统一,不一样的话：1.用被测基因引物的退火温度跑个普通PCR,条带到底出不出,2.确认被测基因引物没有问题以后,按照它的退火温度,设计一个配套的内参引物.
话说回来,所谓老板让做内参的条件,拜托你也检验一下,老板不是神啊.
我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门 老板让做内参的条件 反复做也没有要P出来的目的条带 我的退火温度是55 可以 为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? 用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致. 用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致. 请问做半定量时,可以通过调节PCR后的浓度将内参基因的条带调成一致么? 请问,GAPDH作为RT-PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, western blot的内参总是做不好...老是条带不一致 内参基因是怎么挑选的,我做的是昆虫,不同昆虫用一样的内参吗? 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因