如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:政治作业 时间:2024/05/21 22:49:32
如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?
我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转化后测序两者比较起来有什么优缺点?会影响结果的真实性吗?
我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转化后测序两者比较起来有什么优缺点?会影响结果的真实性吗?
楼上说的是一方面.
PCR产物测序也是可以的,可以送粗样,也就是不纯化的,也可以送纯化好的.
但很多公司测的不是很好,所以一般建议转到克隆载体中保存了送菌液或质粒测序.
PCR产物纯化是去除多余的dNTP和引物二聚体.用纯化好的片段连接转化可以降低背景,提高转化效率.通常转化后我们用几种方法来确认转化子,抽质粒酶切是比较可靠的.选择酶切大小与预计一致的克隆去测序.
PCR产物测序也是可以的,可以送粗样,也就是不纯化的,也可以送纯化好的.
但很多公司测的不是很好,所以一般建议转到克隆载体中保存了送菌液或质粒测序.
PCR产物纯化是去除多余的dNTP和引物二聚体.用纯化好的片段连接转化可以降低背景,提高转化效率.通常转化后我们用几种方法来确认转化子,抽质粒酶切是比较可靠的.选择酶切大小与预计一致的克隆去测序.
如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?
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