这是一道考研题：现需要得到某个基因的蛋白表达产物,用来制备该基因的多克隆抗体,请写出具体的实验方案

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/25 13:32:15

这是一道考研题：现需要得到某个基因的蛋白表达产物,用来制备该基因的多克隆抗体,请写出具体的实验方案
具体的实验方案应包括：从材料准备到基因克隆、蛋白质的获取.

下面是通过原核表达系统得到基因表达的产物以及制备多克隆抗体的一种方法：
1.得到目的基因：设计引物（引物上带有酶切位点）→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上
2．得到目的蛋白：将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,摇菌过夜→提取质粒,进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21（DE3）菌系中→诱导表达蛋白→进行SDS-PAGE检测是否表达出正确大小目的蛋白→大量诱导→得到表达蛋白的DE3
3.纯化目的蛋白：将菌进行超声破碎→引用Ni-His结合树脂4℃结合过夜→应用不同洗液洗脱得到纯化的目的蛋白→应用BSA对蛋白含量进行定量
4.应用得到的纯化目的蛋白150mg目的蛋白+弗氏完全佐剂对兔子进行一免,以后每次应用150mg目的蛋白+弗氏不完全佐剂加强免疫2-3次（两周加强一次）→最后一次免疫10天后采血→这样就制备得到兔高免血清
5.纯化抗体（可做可不做）：应用抗体纯化试剂盒对得到的血清进行纯化,得到纯化的兔免目的蛋白的多克隆抗体

这是一道考研题：现需要得到某个基因的蛋白表达产物,用来制备该基因的多克隆抗体,请写出具体的实验方案拟南芥中某一基因,该基因的产物能与蛋白X相互作用,请设计一个实验,从拟南芥中克隆该基因设计实验克隆基因查询基因序列数据库,检索获得烟草肌动蛋白基因的完整序列.请设计实验方案从烟草中克隆该基因. 设计一个基因克隆的实验方案大肠杆菌表达带有GST标签的X蛋白,免疫家兔获得该融合蛋白的多克隆抗体血清,设计实验纯化X蛋白特异性抗体请设计一个实验,从生物体内克隆一个功能基因,并对所克隆的基因及其表达产物进行全面鉴定. 绿色荧光蛋白的基因克隆实验怎么做? 1.常用基因表达的真核宿主菌 2.鼠源性单克隆抗体改造后的抗体类型 3.制备基因克隆酶大致哪些步骤求基因克隆的完整实验方案,谢谢啊假如你有某种真核生物的某个未知蛋白的部分纯品.怎样设计实验获得其基因并表达该蛋白多克隆抗体的制备必须是原核表达的蛋白吗?真核的可以吗,例如PcDNA3. 含有目的基因的克隆载体打入生物体内,是如何表达蛋白的呢?