设计一个基因克隆的实验方案
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:综合作业 时间:2024/05/18 21:31:10
设计一个基因克隆的实验方案
克隆什么基因?
为什么克隆基因?
用途是什么?
再问: 选择一个林业树种的目的基因(需命名,如控制苹果果皮颜色基因Mdfsc(Malus domestica fruit-skin color-related gene)),从核酸(主要是RNA)的提取纯化、目的基因的分离克隆、目的基因的瞬时表达模式、原核表达、遗传转化(即通过转基因植物的功能研究)等几个方面设计一套实验方案,以技术路线图示结合文字描述为佳。关键的实验步骤(如RT-PCR扩增目的基因核心片段的简并引物如何设计?)须阐述清楚。
再答: 1. 目的cDNA的获得。使用试剂盒或者trizol法提取总RNA,然后使用反转录试剂盒将mRNA反转录为cDNA。 2. RT-PCR扩增。以上步得到的cDNA为模板,进行RT-PCR反应,扩增目的cDNA。(引物设计使用软件primer或oligo等等,加上特定的限制性内切酶位点。) 3. PCR产物跑琼脂糖凝胶,切胶回收(有试剂盒) 4. 根据目的的不同,选择不同的载体,与目的回收产物一起进行酶切 5. 用连接酶把酶切片段连起来,测序,保证方向和阅读框不变。 6. 根据不同的目的,还有可能要通过设计特定的引物将目的cDNA与标记基因(如GFP)连起来 7. 转化(大肠杆菌或农杆菌),用相应的选择性培养基培养 8. 挑取阳性菌,验证。 9. 提质粒,测序。 10. 如果是转化植株的菌,通过侵染植株或愈伤组织获得转基因植株。
为什么克隆基因?
用途是什么?
再问: 选择一个林业树种的目的基因(需命名,如控制苹果果皮颜色基因Mdfsc(Malus domestica fruit-skin color-related gene)),从核酸(主要是RNA)的提取纯化、目的基因的分离克隆、目的基因的瞬时表达模式、原核表达、遗传转化(即通过转基因植物的功能研究)等几个方面设计一套实验方案,以技术路线图示结合文字描述为佳。关键的实验步骤(如RT-PCR扩增目的基因核心片段的简并引物如何设计?)须阐述清楚。
再答: 1. 目的cDNA的获得。使用试剂盒或者trizol法提取总RNA,然后使用反转录试剂盒将mRNA反转录为cDNA。 2. RT-PCR扩增。以上步得到的cDNA为模板,进行RT-PCR反应,扩增目的cDNA。(引物设计使用软件primer或oligo等等,加上特定的限制性内切酶位点。) 3. PCR产物跑琼脂糖凝胶,切胶回收(有试剂盒) 4. 根据目的的不同,选择不同的载体,与目的回收产物一起进行酶切 5. 用连接酶把酶切片段连起来,测序,保证方向和阅读框不变。 6. 根据不同的目的,还有可能要通过设计特定的引物将目的cDNA与标记基因(如GFP)连起来 7. 转化(大肠杆菌或农杆菌),用相应的选择性培养基培养 8. 挑取阳性菌,验证。 9. 提质粒,测序。 10. 如果是转化植株的菌,通过侵染植株或愈伤组织获得转基因植株。
设计一个基因克隆的实验方案
设计实验克隆基因查询基因序列数据库,检索获得烟草肌动蛋白基因的完整序列.请设计实验方案从烟草中克隆该基因.
求基因克隆的完整实验方案,谢谢啊
试设计一个实验,来克隆鉴定调控两近源物种某一差异性状的基因
请设计一个实验,从生物体内克隆一个功能基因,并对所克隆的基因及其表达产物进行全面鉴定.
设计克隆一个基因的CDNA序列的实验!注意是实验哦!周四之前!谢谢,满意再+50!
拟南芥中某一基因,该基因的产物能与蛋白X相互作用,请设计一个实验,从拟南芥中克隆该基因
分子生物学方面的,设计一组实验克隆一个你感兴趣的人类基因,并对基因产物大量表达与纯化
怎样发掘和分离克隆一个新的抗稻瘟病基因,并利用它来改造稻瘟病的水稻品种.请帮我设计一个方案.
如何设计一个好的实验方案
采用质粒载体克隆目的基因,请问如何准确筛选出带有目的基因的阳性克隆?实验方案和基本流程?
如果你想了解某个基因的功能,请设计实验方案达到你的目的