氨苄抗性筛选的单菌落在含氨苄的液体培养基里为啥不长
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/17 00:22:33
氨苄抗性筛选的单菌落在含氨苄的液体培养基里为啥不长
我在含氨苄的LB平板上长的单菌落,为啥挑到含氨苄的LB液体培养基里就不长了呢,固体和液体培养基氨苄的浓度都是50ug/ul,有谁知道原因lo
补充,菌落是DH5a大肠杆菌,用的是PMD-18 simple 的载体,感受态细胞是自己制的
我在含氨苄的LB平板上长的单菌落,为啥挑到含氨苄的LB液体培养基里就不长了呢,固体和液体培养基氨苄的浓度都是50ug/ul,有谁知道原因lo
补充,菌落是DH5a大肠杆菌,用的是PMD-18 simple 的载体,感受态细胞是自己制的
我也遇到过这个问题,有两种情况.
1、如果是出现在转化后,则要看转化后长出菌落的多少.若这个平板上密密麻麻都是菌落,有可能是氨苄失效或部分失效(毕竟要趁培养基未凝的时候倒平板,可能加入氨苄时温度高了点;又或者是平板放存时间过久).若平板上只是零星长了几个菌落,则可以考虑是杂菌或活性不好的转化菌.个人认为固体氨苄培养基的环境比液体氨苄培养基优越的多,这也是为什么长时间冻存的菌会先划平板活化一下的原因.
此时建议重新倒平板,或重新做连接转化.
2、我还遇到过筛选出来的目的菌在冰箱冻存时间过久,复活时在平板上生长,但在液体培养基中繁殖极度缓慢,基本不长的情况.
后来,我用保存的质粒重新转入了感受态细胞,解决了这个问题.
希望以上对你有所帮助.我觉得实验中,找原因固然关键,但有时候重新做一次实验更能解决问题.因为,很多不成功的结果是由偶发因素导致的.
1、如果是出现在转化后,则要看转化后长出菌落的多少.若这个平板上密密麻麻都是菌落,有可能是氨苄失效或部分失效(毕竟要趁培养基未凝的时候倒平板,可能加入氨苄时温度高了点;又或者是平板放存时间过久).若平板上只是零星长了几个菌落,则可以考虑是杂菌或活性不好的转化菌.个人认为固体氨苄培养基的环境比液体氨苄培养基优越的多,这也是为什么长时间冻存的菌会先划平板活化一下的原因.
此时建议重新倒平板,或重新做连接转化.
2、我还遇到过筛选出来的目的菌在冰箱冻存时间过久,复活时在平板上生长,但在液体培养基中繁殖极度缓慢,基本不长的情况.
后来,我用保存的质粒重新转入了感受态细胞,解决了这个问题.
希望以上对你有所帮助.我觉得实验中,找原因固然关键,但有时候重新做一次实验更能解决问题.因为,很多不成功的结果是由偶发因素导致的.
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