32a质粒转化BL21,涂氨苄抗性板有菌落,检测不出目的条带,请问如何解决这个问题?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 03:45:23

应该从以下几个方面考虑：
可能是目的基因没有整合到32a中；
可能是PCR模板量不足；
可能是挑取的菌落为假阳性；
可能是PCR反应条件不合适.
还有的时候出现的极端的原因,是细菌就是无法整合这个基因,所以无论如何都无法得到阳性结果,我就遇到过这种情况.
这类实验经常有这种问题,最有效的方法就是从头开始重新做,因为可能出问题的地方比较多,而我们又没有时间逐个去分析.

转化后菌液pcr有目的条带,然后提质粒和双酶切验证.但是没有得到目的条带. ,质粒上有四环素抗性基因和氨甸氢酶素抗性基因,把目的基因插入四环素抗性基因所在的位置,为什么还要用氨甸青霉素来检测? 菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带? 请问PCR过程中目的条带不够亮,是什么原因造成的?应如何解决? 、在受体细胞中能检测出目的基因,因为（） A、目的基因上有标记 B、质粒具有某些特定基因 C、重组革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带. 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 感受态细胞有沉淀BL21制备感受态细胞,用CaCl2/15%甘油悬浮后,-20度保存,发现底部有沉淀.转化质粒时,37度单菌落菌液PCR检测请问转化的单菌落如何用菌液PCR检测? 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? RAPD反应,DNA检测有条带,PCR没有条带,请问谁知道原因啊?