转录的RNA探针跑胶,目的条带上面出现拖带是怎么回事
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/17 05:41:39
如果实验目的只是基因型鉴定,对PCR产物无其他要求的话,二聚体并非不能忍受,可以尝试以下方法优化反应条件:1.确定DNA模板为阳性,即确定含有目标序列;2.对退火温度设置温度梯度,琼脂糖电泳检测是否有
当然不一定,比如说你的目的基因的copynumber高或者PCR的效率高都会使得beta-actin的条带不如目的基因的条带亮
存在两种可能性,第一,引物设计错误,可以将引物和参考序列进行拼接后看看能不能顺利拼接,以及拼接之后的目的片段长度;第二,可能是非特异扩增,这个时侯如果确定引物位置没有问题,可以调整退火温度,以及PCR
核糖核苷酸,产物是RNA,原料当然是RNA的基本单位追问可是答案是基因呢我没想明白回答基因:具有遗传效应的DNA片段.DNA有编码区和非编码区,只有编码区的才会进行转录和翻译,遗传效应才会表达出来,所
特异性会很差吧毕竟内含子会把外显子分割成很多段
OD值可以直接测,用分光光度计测可是RNA跑胶,不是你是否需要吗?
RNA是单链结构,逆转录时不需解旋,DNA转录时是边解旋边转录
转录是指从DNA到RNA的过程转运RNA的前身其实也是从DNA转录过来的----------------------------扩展下,不仅仅mRNA,tRNArRNA都是转录而来的---------
mRNA是指经过转录后在经过剪切和拼接步骤的成熟的RNA
有RNA杂交和DNA杂交之分.如果是RNA杂交,只要有转录的mRNA且没有DNA污染,则探针DNA可与RNA杂交产生信号.也就是说只要没有DNa污染,能产生信号则表明基因转录了mRNA.
探针缺乏启动子等顺式元件无法转录,而且通常也不会有正确的阅读框架,所以不能转录更不能翻译出蛋白
1、内参没有被扩增出来2、电泳时内参没加loadingbuffer或染料
因为这两种RNA的相对含量啊亲.那两条带一条在3.8kb,一条在2kb,都是rRNA的一部分,本来的相对含量大概就是1:2.另外,要达到这两条带1:2的比值比较难,只要最下面弥散的带不多质量就还可以,
恐怕还是cDNA的问题,actin因为量比较丰富,所以即使破坏一些仍能P出来,但你的目的基因就不同了
其实,DNA转录成RNA时不是一开始就是成为我们后来看到的那些进行翻译功能的RNA的,在转录时,是把所有的DNA都转录的,但是,在转录后还要进行转录后加工,在加工的过程中,那些内含子中的序列就被切除,
你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸标签的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂蛋白,也可能目的蛋白部分降解.要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到.可能试试再加一
因为目的基因为dsDNA,mRNA与其中的一条DNA单链可以杂交.再问:可否具体描述一下过程呢?不是很清楚啊~再答:就像DNA-DNA双链一样,形成DNA-RNA杂交分子
这就是特异性不好,建议做如下改进:1,控制好RNA提取过程,尽量减少RNA降解和基因组DNA的混入;2,严重怀疑你的模板量过高,把模板稀释10-1000倍的梯度试试;3,做二阶段温度pcr,先用稍高退
是由目的基因的所包含的DNA序列根据转录对应规则推导出来的
总共三条带,从大到小依次是28S,18S,5S,亮度依次递减.正常情况应该是28S比18S条带亮,宽度是它的2倍,5S则很淡