OVERLAP引物还需要磷酸化再连接吗

呃,难道你不会设计引物?获取基因不需要用内参.内参是做表达分析时才用的.比如你做RT-PCR考察不同组织中HintI表达差异时才需要用内参的.

你理解的不错,每次复制都需要消耗一对引物.不过原理还是要好好学哦.首先引物是论“对”就是两条（rapd等特殊pcr用单条,lamp用6条……算了,那个不是pcr）,这n对引物是完全一样的.不要说“段”

因为DNA聚合时需要3‘OH,这个只能由引物提供（没原因,就因为是那样）.这个引物是一小段RNA,引物绝对是RNA,而不是DNA.看看DNA复制需要什么酶就知道了,需要依赖DNA的RNA聚合酶（DDR

试试把退火时间延长一些,看能不能把两条链连上.一般就是照着引物的Tm值做就可以的.再问：退火时间是30S，应该足够了，对于退火温度能给个建议吗？我现在不加两端引物，先做Pool，看看能不能连，谢谢你的

不需要复制,引物是配比好的,请看PCR的原理.

主要看你后续做什么实验,如果是准备连接的话,为了防止载体自连,可以将载体去磷酸化,目的片段不需要.

DNA复制的引物是一小段RNA,由引发酶合成.由于DNA聚合酶不能从头合成,所以必须先由一段RNA引导,在复制完成后除去,再用DNA代替.当然,在另外一些DNA复制模型中,末端的茎环结构也可以引导DN

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引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链.体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针

需要购买的做pcr扩增用的试剂:PCRmix,或者酶,dntp等,电泳的试剂：胶,buffer,核酸染料,marker.如果做荧光定量或者测序,需要荧光修饰的引物,还得合成.耗材:pcr板,吸头,pc

是不是就是forward和reverse如果是双链DNA做模板的PCR的话就无所谓但是如果是RT-PCR,从RNA生成单链cDNA的话,你的forwardprimer必须跟原来的RNA的序列一个方向,

最前端的轮子重叠了cuttingedge前端的再问：这句英文是ANCA数控磨床上的，好像有点讲不通的啊再答：切边轮重叠

可以使用蛋白磷酸化水平检测试剂盒（BSP061）或磷酸化蛋白凝胶检测试剂盒（BSP043）来区分蛋白质是否已经磷酸化或者已经脱磷酸化.

其实就是PCR,做两次,把两段序列融合在一起,第一次PCR的时候,第一段序列的3'引物和第二段序列的5'引物要有一段互补区,然后用第一次PCR的产物做模板,第一段序列的5'引物

为什么需要有RNA引物来引发DNA复制呢?这可能尽量减少DNA复制起始处的突变有关.DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错,因此,用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除,提高了DNA

不需要,加入体系中的引物量是过量的,同样过量的还有dNTP,完全可以满足PCR多个循环的需求

注意实验员的身体健康

可以在引物上添加不配对的碱基,但是在引物的3‘端,至少有三个碱基是严格配对的.但是这样的操作主要是为了添加酶切位点或者flag等.Tm值是根据两条链的退火情况来计算,不配对的碱基不算在内,所以你添加不

没错,DNA的两条连是互补的,但是引物绝对不可以互补.引物是放在DNA两条连的各一端引导游离DNA上DNA链,不仅不可以互补,还要尽可能的不同.

在体外进行PCR等用人工合成的寡核苷酸作为引物,通常是DNA；生物胞内复制需要RNA做引物,生物本身能够合成.