菌落pcr不出带原因

原因有很多,第一：培养基配方不适合头发中的细菌生长.第二：没有在培养基充分冷却的情况下进行接种.第三：培养时间不够充分.第四：接种好后在紫外灯下放置.第五：头发放置在紫外灯下或者经过灭菌处理.第六：没

引物3'端末端有互补序列,这样造成引物以引物为模板进行延伸,造成引物二聚体.

菌落PCR建议,对菌落进行预变性处理,将挑取的单克隆溶于10ul无菌水（1半保存）,分5ul出来进行95度10min变性然后直接放冰上进行预变性处理,相当于提高模板量,提高产量.　　有杂带,建议提高T

博凌科为生物科技-为你直接挑曲单克隆,一般使用特异引物,在体系中进行PCR即可,细胞热解后DNA释放就能进行PCR扩增~

高手们好.最近做酶切连接转化,最后做鉴定时,以菌落为模板进行PCR时可以见到有目的条带；当把菌落接种到LB液扩菌后,以菌液为模板进行PCR时却什么东东都没有?请问会是什么原因啊?多多指教啊!建议重新以

这很正常,一般做蓝白斑挑斑会更精确,不过现在的连接酶成功率很高,不少已经达到90%以上,但仍然存在只转化了质粒而未连接成功目的条带的菌落.所以挑斑时一般要多挑几个,而且选单菌落,可以画圈圈分散开来挑斑

不需要.但是菌液PCR需要在开始循环前加热使菌体破裂,DNA变性.所以最好选用HotStartPCR,一举两得.再问：那不是要先提取DNA吗？菌液PCR需要在开始循环前加热使菌体破裂是在pcr仪里直接

ROX加多了,终浓度太高?或者模板量,PCR扩增效率低下?

1、操作者不熟练,加样时存在取样误差2、PCR仪器不稳定,如温度,湿度影响3、试剂不稳定,如你的DNA模板降解,Taq酶活性下降等

没连进去呗可能是最初的PCR就没扩增出来你要的条带调整下退火温度或者直接连T载体测序或者换对引物再问：直接连T载体测序，这个怎么弄？引物是别人设计好的，所以很纠结。我们拿菌液提质粒有，只是不很多。再答

不知道你说的是PCR循环中的延伸还是循环结束后的终延伸.循环中的延伸步骤实际上是让taq聚合酶开始合成DNA,taq聚合酶是高温活性酶,在72度的时候合成DNA.如果是循环结束后的5～10分钟终延伸,

利用菌落作为模板进行PCR扩增,验证该菌落里是否带有目标片段.但是由于PCR是一个级联放大的过程,所以即使菌落中不含有目标片段,而是菌落表面沾有一部分之前连接,转化中用的目标DNA,也会导致PCR获得

可以的.我们验证转化结果时就是根据这个原理的,只不过一般是扩增质粒内的基因,但如果有正确的引物,同样可以扩增基因组上的基因的关于单菌落的处理,一般是把菌落挑到无菌水里,然后沸水煮5min就可以了,目的

取1ml菌液离心去培养基或者刮取少许菌苔,加入100μl无菌水混匀.EP管放入冷水中,然后开始加热,让菌液慢慢升到100℃,而不是在水已经沸腾的时候加入菌液去煮.沸腾开始后计时,十分钟后迅速放入-20

出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带.非特异性条带的出现,其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体.二是Mg2

为什么不抽基因组?抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.如果样本只是一个菌,

如果你确认“转化后挑取含有目的片段的单菌落”这个步骤正确的话,就是你的PCR出问题了么,继续扩增便可.目的片段与载体脱离还是保留的菌种失活?应该都不会.我认为你的PCR体系除了问题,换一组酶和buff

建议你购买专门的细菌抽提试剂盒,或者在菌液中加入胰蛋白酶37度消化半小时

有抗性吗?菌扩增,应该是重组质粒有转化进去的.菌液PCR建议：上游引物：选择载体上的一段序列下游引物：选择目的基因的反向引物这种假阳性可能性很小再问：这样不就要重新设计引物了?我最大的问题是明明是从有

1退火温度不合适2引物不合适3模板有问题4酶由问题