荧光定量PCR的CT值不在标准曲线内,数据可靠吗

荧光定量PCR和实时荧光定量PCR是一样的啊

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

RT可能含义：reversetranscribe是逆转录,那么相应pcr应该是由rna凡转录cdna过程realtime实时定量那么就是荧光定量pcr了

阈值和基线的设置肯定会影响Ct值,你可以采用每次反应完后软件自己选定的阈值.你也可以手动调整,但是如果你是相同的模板,做不同反应,那你必须使两次实验的阈值和基线调到相同.使用相同的标准品,才能减小不同

这个很简单啊.你做了一次实验,得到的样本做了一次PCR,得到了一次的相对定量（设对照组为1）.然后重新做实验,再做PCR,又得到一组,这样至少重复3次,就有3组相对定量了.计算标准差对照组的标准差：取

博凌科为-为你如果lz确实已经确定该基因SNP位点以及突变型,你可以选择荧光定量PCR进行检测,检测方法是：1、探针设计在突变位置,有几个突变点设计几个（不同突变型需要不同的荧光标记：例如,野生型探针

仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节

如果你测定的基因序列未知,可以用同源基因或者别的物种的同类基因序列来设计引物,进行PCR,看看是否能够扩增出产物,并对产物进行确认,判断扩增的特异性.如果确认无误,就可以进行荧光定量PCR.再问：我想

看标准曲线是否反映出了标准物质的真实浓度再问：那请问标准曲线中的R2代表什么意思？为什么说R2>0.99可信度就高？再答：R2决定系数，英文（coefficientofdetermination），有

是的啊!但是你要在一起上标注好哪个是标样以及重复,他就自动生成了再问：谢谢请问具体怎样设置最后才会自动出现标准曲线啊？？？再答：每个机器不一样我用的是biorad的，然后P上之前有一个面板显示96孔，

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

你一次实验做的数据,内参可以得到几个CT值,目的基因也会得到几个.这样的话,根据平均的CT值,就会得到一个倍数（相对量）.实验肯定不会只做一次吧,至少重复3次以上.这样就会得到3个以上的倍数了.3个以

最好是做标准曲线,要看看扩增效率的.调CDNA就还了~再问：调CDNA和总RNA是一样的吧？反转录不是将总RNA都反转录成CDNA吗？再答：不一样的，不能保证每管的反转录效果一致再问：哦，直接测定cD

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

不需要完全符合等差数列的.你说说看相关系数R2和扩增效率E的结果怎么样,之后再考虑调整体系和qPCR程序.

看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来

你是直接用primer5设计的引物吗?有时候时会遇到你说的问题,你可以在软件设计出来的基础上,手动的把你的引物移动几个碱基,可以减少一些二聚体或错配,而且,软件给出来的这些结果都只是计算值,你实际应用

扩增效率E和R的平方

荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品的初始模版.

△Ct（n）=Ct目的基因（n）-Ct内参基因（n）；△△CT（n）=△Ct（n）-△Ct（1）；然后算出2-△△CT；标准差我是同一处理做了3个平行算出来的.没法下标,用括号处理,