bca测蛋白wb内参不齐

可能原因很多：1同源蛋白；2表位相似的杂带；3自身蛋白的修饰,糖基化,磷酸化等；4降解再问：那要怎么确认是什么原因造成的呢一共做了三次都出现这种情况再答：先看看旁边的带是多大。和你的同源蛋白大小类似吗

DTT不是上样的时候才加,可以在配制loadingbuffer的时候事先加好.你看看DTT的分子量,再算下该加多少克~

点个预染marker就看到了

10%的分离胶,上样量一般10微升-15微升

要回答这个问题必须看你引物的序列.你贴出来我帮你查一下,你自己也可以BLAST一下.如果在人和鼠的基因中都可以BLAST到,则可以用,否则就不可以.虽然这些HouseKeeper基因的同源性很高,如果

你用标准的已知浓度的BSA溶液配几管不同浓度的,然后在分光光度计上测出来,把读数跟已知的浓度做一个曲线（有可能是直线）,这就是你的标准曲线然后再测你的目标样品的浓度,用读数在标准曲线上找到对应的真实浓

BCA实际盒我用过,确实比考马斯亮蓝试剂要灵敏多了.操作也很简便原理简介BCA(bicinchoninicacid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成.众所

westernblot检测是用特定抗体检测特定蛋白,BCA法是检测蛋白浓度,即使BCA法检测蛋白浓度高,但也不一定有你检测的蛋白啊?还有你要保证你westernblot操作没问题哦,最好做个内参.

必须的,非离子表面活性剂会干扰BCA的测定结果.具体的原因应该是非离子表面活性剂的存在会影响Cu和蛋白质的结合.不过皮尔斯的MicroBCA据说不受非离子表面活性剂影响.不过你的膜蛋白没有去污剂好溶解

试剂A:1％BCA二钠盐,2％无水碳酸钠,0.16%酒石酸钠,0.4％氢氧化钠,0.95％碳酸氢钠.混合调PH值至11.25.试剂B：4％硫酸铜.蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配

这个不一样的.ELISA相对来说要简单一些,订一个试剂盒,而组织处理的话,用PBS研磨,离心取上清就OK了.一般不用蛋白提取试剂,蛋白须保持天然结构.不可变性（除非试剂盒有特别说明）再问：提完单白后，

失败可能非常大

当目的蛋白的分子量大小与选用的内参蛋白分子量大小相差比较明显情况下,可以在转膜后预染,根据蛋白质Marker的大小将膜剪为大分子量和小分子量两部分,使内参蛋白与目的蛋白分开.然后两块膜分别与内参蛋白抗

要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是WesternBlot.因为WesternBlot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化

1.把标准品的浓度和对应吸光值输入到excel里面,如果酶标仪直接有导出功能的话,直接导出到excel里面就行.2.选中浓度和吸光值,插入散点图3.选择任意一个点,点右键,选择添加趋势线4.在分析类型

标准品就是纯的那个蛋白用来做一个不同浓度梯度下的标准品曲线这样你测出来的吸光度再对照标准品曲线去换算浓度是多少

30是指内参上样量是30微克的情况下,具体上多少就是多少.灰度值差异很大,所以不能直接用来分析.要分析就是用比值分析.用比值来分析比较下实验组和对照组就可以避免出现绝对灰度值.

会的WB是把SDS-PAGE的胶片转移到膜上,如果蛋白在SDS-PAGE上会有偏大偏小,印染到WB上也会偏大偏小的.但WB是特异性识别目的蛋白的手段,就算印染出来的分子量有点差距也不影响结果判断的.

该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术.由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术.免疫印迹常用于鉴定某

题目不太清楚.你的样品是什么?会不会不纯含有其他蛋白.染色方法对不对?如果所需验证的蛋白含量很少,银染分辨率比考然高.会不会跑胶跑过头了?