实时定量PCR标准曲线浓度梯度设置几个

荧光定量PCR和实时荧光定量PCR是一样的啊

tpcr的机器会给出cT值和fluorescence的值,cDNA值自己计算

1做标曲才可以算出这对引物的扩增效率（其斜率）,方便用pfaffl方法来进行相对定量（得到的结果相对精确一点）,否则只能默认扩增效率为2,用2^-ddCt(Livak)法来计算2做标曲才可以绝对定量.

请用primerexpress设计就行.你想去找非常保守的区域设计引物?可以,那你把这个物种的所有亚种的此段DNA序列做一个保守型分析就行.一般来说clustalX就可以了.再问：ClustalX排列

小说的文字有很多都不是最准确的,既然上面写的是“实时”,那么就应该是实时荧光定量PCR,否则普通PCR做不到“实时”.所以是一回事.

内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因,又叫看家基因,比如常用的GAPDH,actin.或者18srRNA也可以.如果内参表达量一致,说明你PCR的上样量一致,样本的质量也一致.如果出入很大,说

首先你这样做出来的统计没有意义.应该是至少3次独立实验,而不是重复3次PCR.如果3次试验,每次重复3次（取平均值算一次）.然后先定各个基因在对照组的值为一,再算出其他组该基因的相对量,比如内参CT值

在设置反应程序时,在最后加一步

打开软件-setup-advacedsetup-左手setup中第一行experimentproperties中有一项是whichreagentsdoyouwanttousetodetecttheta

在百度知道里怎么会问这个问题?都有专业的书籍或者文献可供参考的.不同的试剂公司还有荧光定量的培训PPT,你需要的话我可以给你发过去.

说一下自己做实验时候用到的东西,血液提取mRNA还是采用试剂盒来提取,手工法极不推荐,但是试剂盒还是蛮贵的,可以问一下天根公司,价格还算可意,效果也不错.逆转录过程可以用Fermentas一款逆转录试

最好还是在冰上做啦,一次两次没有问题,久了多了可能问题就出来了一般用的是灭菌的双蒸水保证引物的终浓度就可以.都是用水稀释的,没啥差别

这个就是SYBRGREEN的局限了.你要做内参话,必须在不同的管子里面另外在同时做.就像楼下说的那样.这样的话,不同管子见的加样误差就会干扰实验数据.内参的目的就是来对照加样误差的.实际上,真正的内参

看标准曲线是否反映出了标准物质的真实浓度再问：那请问标准曲线中的R2代表什么意思？为什么说R2>0.99可信度就高？再答：R2决定系数，英文（coefficientofdetermination），有

1、梯度稀释问题（主要引起原因：a加样手法b试用低附着进口耗材）.2、PCR管用高质量PCR管,管身不能做标记.3、RealtimePCR仪器若为顶部激发检测请使用透明光学管盖.4、PCR管不要放置在

聚合酶链式反应(PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增.在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析.无论定性

如果有已知拷贝数的标准品的话就挺好做的加好体系,设一下程序,run.搞定

1.可以测量DNA,cDNA的绝对或者相对数量.扩增曲线（或者Ct值）出现越早,说明靶目标的含量越高.2.可以检测SNAP.单个核苷酸位点的多形性.比如在一个位点上有A和G两种基因型.引物使用一样,但

看你的情况估计是不用设计内参了说下我的看法,仅供参考设置7管标准物质,每个再三次重复.然后再弄上你的样品,先跑跑试试主要步骤就是加好样,设置下程序,然后就开始了.最后比较下测的起始模板量相对定量不需要

1.按照正确的开关机顺序操作,有助于延长仪器的使用寿命,减少仪器出故障的频率.开机顺序：先开电脑,待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机,等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件,进行实验.