作业帮实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：语文作业 时间：2024/05/15 06:42:28
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不同的颜色?如果在样本中加了目的基因和内参的引物,可是只有SYBR Green一种染料,不就分不出两种基因了么?还是我理解的不对?2.相对标准曲线的话,怎么选择合适的样本?网上说需要一个富含内参和目的基因的样本并梯度稀释,最后根据这个曲线来比较不同样本中目的基因的差异.
额,超时了,补充一句
我最近在做pcr,不过身边没有熟练的人,很多基本问题搞不清楚,我用SYBR Green 进行实时定量pcr,看到网上说需要用内参,可是用内参的话,是不是需要用不同的颜色?如果在样本中加了目的基因和内参的引物,可是只有SYBR Green一种染料,不就分不出两种基因了么?还是我理解的不对?2.相对标准曲线的话,怎么选择合适的样本?网上说需要一个富含内参和目的基因的样本并梯度稀释,最后根据这个曲线来比较不同样本中目的基因的差异.
额,超时了,补充一句
这个就是SYBR GREEN的局限了.你要做内参 话,必须在不同的管子里面另外在同时做.就像楼下说的那样.这样的话,不同管子见的加样误差就会干扰实验数据.
内参的目的就是来对照加样误差的.
实际上,真正的内参是在同一个管子里面完成的.不过不是用SYBR GREEN来做的.而是用Taqman 引物和探针组合来做的.在同一个管子里面,同时加入你目的基因和内参基因的引物,而目的基因的探针使用FAM荧光素标记,而内参则使用VIC荧光素标记.这样反应同时进行,而且不受不同管子间加样误差的影响.
标准曲线,一般是使用已知浓度的,带有目的基因的质粒来做的.你说的那个方法,不是标准曲线,仍然是相对浓度的梯度稀释而已.
再问： �����ʣ�1��������Ҫ��������һ���ǹ��
内参的目的就是来对照加样误差的.
实际上,真正的内参是在同一个管子里面完成的.不过不是用SYBR GREEN来做的.而是用Taqman 引物和探针组合来做的.在同一个管子里面,同时加入你目的基因和内参基因的引物,而目的基因的探针使用FAM荧光素标记,而内参则使用VIC荧光素标记.这样反应同时进行,而且不受不同管子间加样误差的影响.
标准曲线,一般是使用已知浓度的,带有目的基因的质粒来做的.你说的那个方法,不是标准曲线,仍然是相对浓度的梯度稀释而已.
再问： �����ʣ�1��������Ҫ��������һ���ǹ��
实时定量pcr内参以及相对标准曲线的问题
实时荧光定量pcr内参是什么东西
征集相对定量实时荧光定量PCR的相关问题,原理及注意事项.
怎么判断实时荧光定量PCR标准曲线是否准确
实时定量PCR 引物设计的问题,
关于实时定量PCR的问题
请问做实时荧光定量PCR实验时,为什么做标准曲线?
实时定量PCR可以解决什么问题,
荧光定量PCR和实时荧光定量PCR的区别?
本人制作的实时定量PCR标准曲线总不成线性关系,个别样本的浓度达不到设置的标准浓度,请问是什么原因.
还想再向您请教下 关于荧光定量PCR 相对定量内参基因的选择,如果我想用18SrRNA,我该怎么得到这个内参呢
做实时定量PCR内参引物一般是扩增出来多大片段?