做定量的时候基因的CT值大概多少合适

看看你的GAPDH引物Tm多少,有可能是因为PCR条件适合目的基因引物对而不适合内参引物对吗?再问：不知道，我是个新手什么都不懂再答：那么童鞋，你还是找一个师兄师姐前辈高人带一下。网上这样问很难问出来

这个要看你在做PCR前的加样量是否一致.如果加样量是一致的,而内参做出来差别大（比如3-4个CT值）那说明你的实验体系有严重的问题.理论上加入的DNA量一样多,内参的CT值应该都一样.如果你能肯定加样

阈值和基线的设置肯定会影响Ct值,你可以采用每次反应完后软件自己选定的阈值.你也可以手动调整,但是如果你是相同的模板,做不同反应,那你必须使两次实验的阈值和基线调到相同.使用相同的标准品,才能减小不同

建议你还是选择CDS区不一样的地方设计引物吧,这样可以避免交叉污染引起的非特异扩增,扩增的序列长度不一定要一样,每个引物你最好设计两三对,然后做一个相对定量看看不同引物的扩增效率,选择比较好的两对引物

理论上是越一致越好.如果有很大的差异,说明实验有较大的误差,或者样本有降解.

通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的,如果发文章,那么建议你控制在15到35之间吧

仪器配套软件会直接给出来一个CT值,也可自己调节

1.6-kbfragmentencompassingtherp49gene,whichcodesforaribosomalprotein,hasbeenclonedandsequencedinDros

请问你做RealTimePCR做几个循环的?40个吗?40个循环的话,CT值在30左右很正常的啊,CT值30的话大概是10000copies,说明模板含量低嘛,定量定量就是要CT值有大有小的才有比较嘛

没有关系,可以继续按正常步骤计算.内参的CT值通常要控制在25-30,目的基因CT值高,只说明目的基因表达量比较低..没关系..

啥叫不同阶段只要模板不同就要检测内参标准曲线是指拿已知浓度的标准品做出来的曲线不是一个概念

你一次实验做的数据,内参可以得到几个CT值,目的基因也会得到几个.这样的话,根据平均的CT值,就会得到一个倍数（相对量）.实验肯定不会只做一次吧,至少重复3次以上.这样就会得到3个以上的倍数了.3个以

△△Ct=△Ct(试验样品)—△Ct(基准样品)△Ct(试验样品)=Ct（试验样品,目的基因）—Ct（试验样品,内参基因）△Ct(基准样品)=Ct（基准样品,目的基因）—Ct（基准样品,内参基因）2－

用内参的方式进行realtime定量是不需要考虑加样量和反转录效率的问题的,因为结果都是和内参比,和内参同多同少.realtime不准是很常见的事,rna降解、引物特异性差、模板太浓或太稀等等许多因素

不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象,但通常选用内参基因属于表达量较高的持家基因,如果目标基因和内存基因表达量（CT值差）过大,用内参基因来衡量目标基因的

主要看你的CT值大约是多少,如果很大（大于40循环）那么可以判定结果没有问题,如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染.另外你阴性对照加的是水

荧光强度呗再问：具体怎么做？用什么仪器测啊？再答：荧光显微镜拍照然后拿软件统计下荧光强度就可以啦imageJ就可以吧再问：谢谢您的回答，我这么做过，但总觉得数据不可靠，细微差距比较不出来，不过现在看来

博凌科为-为你1.反应循环数不够.一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环（如至45cycles）,但高于45个循环会增加过多的背景信号.2.检测荧光信号的步骤有误.一般SG法采用72℃延伸时

射线会对人体产生损伤是肯定的.在低剂量的情况下,这些损伤可以修复所以不用担心；大剂量长时间照射则会对人体产生永久性伤害,但是这一般只会出现在发生事故的情况下.理论上人体接触射线是越少越好,在不能避免的

△Ct（n）=Ct目的基因（n）-Ct内参基因（n）；△△CT（n）=△Ct（n）-△Ct（1）；然后算出2-△△CT；标准差我是同一处理做了3个平行算出来的.没法下标,用括号处理,