上下游引物是单链还是双链
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/05 20:34:18
你理解的没错.上下游引物同时用才能特异性扩增中间的那部分片段.
上游:5ggaattcatgtttagtttgaaaaaaac3下游:5gggttcgaattagacattgccaacatatt3你要的并不是鉴定引物,而是扩增引物根本不用软件
引物设计原则:1、长度:15—30bp,其有效长度[Ln=2(G十C)十(A十T)]一般不大于38,否则PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最佳作用温度(74度),从而降低产物的特异性.2、G十c含量
为了形象,不写ATCG,换个比较容易看懂的形式模板是:abcd123.456efgh上游引物是:987ABCD123下游引物是:456EFGH789(这里为了方便观察下游印务给出了3’-5‘形式,通常
个人推荐使用PrimerPremier5
上游引物:GAATTCacgcgcaagattagg(后面可以继续加几个碱基,用PRIMER5.0看一下,引物设计多少个碱基合适,每个基因序列不同.我用TOYOBO的KODPLUS的话,就一般引物设计
通俗的讲,引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制.引物的设计因需要增幅的序列而不同是单链
不,需要两条,因为随着你PCR的进行,另一条互补链会被引物扩增出来,因此你需要两条引物都加进去.再问:那么我引物设计的时候,是不是以mRNA为模版与以CDNA为模版设计的引物都可以?再答:都可以,别忘
NCBI上面得到的是mRNA序列可以用oligodt反转录,也可以用与mRNA互补的特异引物来反转录再问:恩,特异性引物有一对,上游和下游,老师问我用上游还是下游,望回答具体点再答:反转录当然是下游了
第一次PCR产物不要做任何处理,直接吸取1微升做第二轮PCR的模板.第二轮PCR过后再跑胶回收你的目的条带.外引物不在你的目的基因上,而在你的目的基因两侧.所以你设计外引物时是从一个很宽泛的范围内寻找
博凌科为-为你上下游温度很接近啊,45度,上下5度,0.2每个梯度.或者直接用47度P
PCR反应第一步DNA双链变性逐步打开,第二部退火时两个引物各自与其互补链的5‘端通过碱基互补结合,并在第三步延伸反应时在引物的3’端不断加上新的碱基从而不断向前延长.每个引物的作用都一样.用上上下游
[color=red][/color]4.28送菌液去某公司测序,昨天收到的测序报告连上下油的引物都找不到.后来我又做了菌落PCR(设阳性,阴性对照)有目的条带.请问各位是什么原因啊?测序结果上不会有
引物有一条和模版的序列相同,而另一条和模版的序列反向互补,上游和下游是自己定的,分别位于模版的两端
以下基于我认为开始的100μM是每一个引物的浓度.你把每条引物稀释10倍到10μM,然后把上下游引物1:1混合在一起,这样上下游引物最终为5μM.PCR的时候10μl的体系里面加入1μl之前混合好的引
这个问题很简单,扩增序列应该称为目的基因,目的基因一般都上万bp,从两头开始当然不合适.PCR扩增只能扩增出上下游引物之间的序列,因为只有引物之间的DNA双链是解链状态的.你的问题说明你对基础知识掌握
一般认为Tm-5度.但是要看你的Tm计算方法,不同公司合成的引物得出的Tm都不一样,你可以做个梯度PCR看看最适退火温度,以后就有经验了.
运用DNASTAR软件把DNA序列反向互补,然后再用引物去匹配就可以了