请问您一个基因的全长已经克隆出来,怎样进行验证呢?从ATG和TGA设引物重新扩增,还是从非编区设引物呢

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/22 00:39:51

请问您一个基因的全长已经克隆出来,怎样进行验证呢?从ATG和TGA设引物重新扩增,还是从非编区设引物呢
我已经从ATG和TGA设引物了，挑了四五个单克隆，可是每个测序结果都有几个碱基突变，导致氨基酸变短……而且每个都不一样……所以不知是不是要从非编码区设引物……

和从哪设计引物没关系如果编码区有突变的话那就肯定不行的
最简单的就是拿去测序 CDS区完全正确就可以了
验证功能的话就做western 以及检测该基因下游targets的表达量比如它可以促进A的表达就转染细胞后检测A的表达量是否上升
再问：那这个怎么办呢，编码区真有个别碱基不对，虽然相似性已达99%了，氨基酸序列差很远……但我们又不需要验证功能……
再答：我能说怎么办呢。。。。反正从实验来说这肯定是不行的。。。。

请问您一个基因的全长已经克隆出来,怎样进行验证呢?从ATG和TGA设引物重新扩增,还是从非编区设引物呢已知一个基因的mRNA和cDNA,我想克隆此基因,进行转染表达,但是设计的引物无法扩增出目的片段……急求! 基因的克隆,转导,表达,在对目的基因PCR时,为什么一些人设计的上游引物不是从ATG开始的,而是从中上段开始我想扩增一段目的基因,只知道一个CDS,ATG开始TAA结束的,后续要表达蛋白,怎么设计引物啊? 我做引物特异性扩增,引物上的TM值是61.9度,我把退火温度从55度降到51度,隔一度试一次,二聚体还是有呢已经知道引物名称,怎么查到引物的序列呢? S rDNA基因的V3区引物与16SrDNA 基因序列的扩增采用细菌通用引物之间有什么区别呢? ncbi上的基因序列是编码链还是模板链呢?如果通过基因名选择,出来是一个反向的序列,对引物设计有无影响? PCR扩增时为什么需要引物呢? 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列已知蛋白质N端序列,要想扩增其全基因,怎样设计引物?从5'端or3‘端已知目的基因全长,如何设计引物克隆全长