老师布置了关于寻找猪肿瘤坏死因子a的基因序列并设计引物表达蛋白,本人完全不会,

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 20:00:17

老师布置了关于寻找猪肿瘤坏死因子a的基因序列并设计引物表达蛋白,本人完全不会,
1.找到猪肿瘤坏死因子a的基因序列；
2.用原核（Pet24a）,酵母（ppiczalpha）和真核系统（pcDNA3.1）表达蛋白,设计实验步骤；
3.三套系统的引物设计,纯化系统地建立（亲和纯化）；
4.提示：真核系统可用6xhis标签系统,另外真核系统表达的基因上游需要加Kozak序列.

1 gene sequence(DNA):
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_010449.2?report=genbank&from=27658519&to=27661277
mRNA（cDNA）序列&蛋白序列：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/47522865
2 提RNA,反转成cDNA,根据猪TNFa cDNA设计引物,将TNFa 克隆.然后设计带酶切位点引物,将cDNA分别亚克隆到Pet24a,ppiczalpha,pcDNA3.1（用载体上的酶切位点分别切载体和片段,然后连接,ppiczalpha和pcDNA3.1注意要加上Kozak序列）
3 参看载体说明书

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