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如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?

来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/14 09:55:18
如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
1 选择载体标准:采用能够在真哺乳动物细胞中能够正常转录的,由启动子、加PolyA 信号,转录终止和可能的内含子、增强子等组成的表达盒的载体,通常还有真核复制起始区,如SV40 ori.
2 转染:化学法如磷酸钙共沉淀,脂质体,或者物理的电穿孔法,都有现成的试剂或者仪器可进行
3 检测:可以用载体上所带抗生素,或者测定目的基因表达:转录产物:real time PCR,翻译产物:western blot