求做western blot时提取贴壁细胞总蛋白详细的protocol

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：生物作业时间：2024/05/15 16:10:34

求做western blot时提取贴壁细胞总蛋白详细的protocol
另外,怎么看到有些protocol上没有煮蛋白这一步呢?是放在微波炉里加热就可以么?新手提的问题有些二~

以6孔板的一个孔为例,先把培养液吸出,加入200ul的细胞裂解液,摇床摇15分钟,加loading buffer冰上放置5分钟,用细胞刮把皿底刮几次,然后全部吸出放到离心管里,95°水浴或者金属浴煮10分钟.
每个人的方法都不太一样吧,有的会在收样之后离心去沉淀,有的会再超声几分钟,有的直接拿loading buffer当裂解液用,个人觉得这些差别都不会影响你实验结果.
不过煮肯定是必须的,不然没法保存

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