焦磷酸测序技术为什么能正确测定DNA的序列
来源:学生作业帮 编辑:作业帮 分类:生物作业 时间:2024/05/17 01:32:25
焦磷酸测序技术为什么能正确测定DNA的序列
最好有具体的例子和步骤
最好有具体的例子和步骤
Pyrosequencing是一项全新的DNA测序技术,可以快速、准确地测定一段较短的目标片段.其基本原理如下:
第1步:1个特异性的测序引物和单链DNA模板结合,然后加入酶混合物(包括DNA Polymerase、ATP Sulfurylase、Luciferase和Apyrase)和底物混合物(包括APS和Luciferin).
第2步:向反应体系中加入1种dNTP,如果它刚好能和DNA模板的下一个碱基配对,则会在DNA 聚合酶的作用下,添加到测序引物的3‘末端,同时释放出一个分子的焦磷酸(PPi).
第2步图示(图片来自互联网)
第3步:在ATP硫酸化酶的作用下,生成的PPi可以和APS结合形成ATP;在荧光素酶的催化下,生成的ATP又可以和荧光素结合形成氧化荧光素,同时产生可见光.通过CCD光学系统即可获得一个特异的检测峰,峰值的高低则和相匹配的碱基数成正比.
第3步图示(图片来自互联网)
第4步:反应体系中剩余的dNTP和残留的少量ATP在Apyrase的作用下发生降解.
第4步图示(图片来自互联网)
第5步:加入另一种dNTP,使第2-4步反应重复进行,根据获得的峰值图即可读取准确的DNA序列信息.
第4步图示(图片来自互联网)
Pyrosequecing技术操作简单,结果准确可靠,可应用于SNP位点检测、等位基因频率测定、细菌和病毒分型等领域.
第1步:1个特异性的测序引物和单链DNA模板结合,然后加入酶混合物(包括DNA Polymerase、ATP Sulfurylase、Luciferase和Apyrase)和底物混合物(包括APS和Luciferin).
第2步:向反应体系中加入1种dNTP,如果它刚好能和DNA模板的下一个碱基配对,则会在DNA 聚合酶的作用下,添加到测序引物的3‘末端,同时释放出一个分子的焦磷酸(PPi).
第2步图示(图片来自互联网)
第3步:在ATP硫酸化酶的作用下,生成的PPi可以和APS结合形成ATP;在荧光素酶的催化下,生成的ATP又可以和荧光素结合形成氧化荧光素,同时产生可见光.通过CCD光学系统即可获得一个特异的检测峰,峰值的高低则和相匹配的碱基数成正比.
第3步图示(图片来自互联网)
第4步:反应体系中剩余的dNTP和残留的少量ATP在Apyrase的作用下发生降解.
第4步图示(图片来自互联网)
第5步:加入另一种dNTP,使第2-4步反应重复进行,根据获得的峰值图即可读取准确的DNA序列信息.
第4步图示(图片来自互联网)
Pyrosequecing技术操作简单,结果准确可靠,可应用于SNP位点检测、等位基因频率测定、细菌和病毒分型等领域.
焦磷酸测序技术为什么能正确测定DNA的序列
若已知某蛋白的保守序列,综合采用哪些技术可获得其DNA全长序列?
基因芯片的测序原理是DNA分子杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法.先在一块基片表面固
DNA序列测定 多久出结果
请问加减法测定DNA序列时是怎么从放射自显影的图谱上读出序列的?
为什么DNA测序很难测出500bp以上的序列
利用末端终止法测定DNA序列需要的成分有
为什么环状DNA分子中没有游离的磷酸基团
请从网上搜索大鼠3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的基因组DNA和mRNA序列
为什么DNA和RNA组成的,水解之后能得到一种磷酸,两种五碳糖和五种碱基?
测序以后拿回来的DNA序列,怎么判断它的里面有没有引物序列?如果有的话怎么切除引物序列?
人工合成的目的基因DNA序列与人的干素基因外显子DNA序列为什么不一样?