PCR长的目的片段需要注意什么

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/05/25 01:39:06

PCR长的目的片段需要注意什么
我设计的引物溶解温度是56.3和60.9度,相差有些大.我的目的片段大概3.7Kbp.我用的天根的Taq酶用通用的时间退火温度56度P出来几百bp的片段,然后又延长退火时间到4分钟改退火温度为53度再P,结果什么也没P出来.怎么办?我在网上查了一下有说要用高保真酶LA Taq和invitrogen的Taq,我同学说我的第一步94度的时间4分钟太长了（不是30循环里的第一步）请问我应该选择什么试剂和什么反应条件才能P出我的目的片段?

扩不出来应该是你的退火温度的问题.用不用高保真酶的区别就在于会不会在延长的时候出错.
你可以做一个梯度PCR,如果还是没有扩出来的,那就是你的药品问题了,buffer啊,dNTP啊,酶啊有问题、

pcr需要注意的问题 PCR技术的灵敏性提示我们在进行PCR操作中需要注意什么? 多重种类特异性PCR需要注意什么? 需要做PT-PCR的组织收集时需要注意什么 PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理? PCR在扩增长片段的设计引物时需要注意什么? pcr扩增目的片段时,在第几个循环后才能出现目的片段长度的双链DNA分子? 大家好,问一个不能等到台面上的问题：目的基因片段是扩增片段吗?什么是RT-PCR的目的基因片段,谢谢我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 对PCR产物进行电泳分析有什么作用,目的片段大小多少多少bp是用来干什么的,知道的来说下, RT-PCR怎么都没法克隆出目的片段 PCR扩增出目的片段之后为什么要酶切?酶切下来的是目的片段和载体?然后再把它们连起来?很困惑.