请问大侠,冷冻干燥的蛋白,准备做western,用什么溶解?

来源：学生作业帮编辑：作业帮分类：综合作业时间：2024/06/08 23:50:14

水,或者PBS都行,因为溶解了以后肯定还得加loading buffer去煮样以后才能上样.
再问：那多少克溶于多少毫升PBS？
再答：这个取决于你的样品，因为主要看你western检测的目标蛋白的大概丰度怎么样。通常一个孔的上样量在25-40ug，蛋白太多的话电泳分离很难看，但是如果太少，又会导致目标蛋白太少，不容易被检测到。

另外，胶的上样量是有限的，一个孔大约能上15ul样品，如果超过太多，例如要上30ul，你的胶孔又比较小的话，就会造成样品溢出。
根据这个来计算，一个孔15ul样，达到30ug的总蛋白量，那么蛋白的浓度就是2ug/ul左右。可以2mg溶于2ml。

但是如果你的目标蛋白丰度太低了，正常值检测不到的话，可以适当提高蛋白浓度，这样可以在15ul体积内多上点蛋白。

所以首先考虑每孔的上样体积，再考虑每孔的总蛋白量，最后根据丰度综合考虑就可以得出配制浓度。如果对这些都不太了解，至少搞清楚每孔上样体积，就用上面的浓度直接试就好了。

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