作业帮请问羧甲基纤维素和DEAE纤维素分离蛋白有什么区别?
来源：学生作业帮 编辑：作业帮 分类：化学作业 时间：2024/05/08 22:53:54
请问羧甲基纤维素和DEAE纤维素分离蛋白有什么区别?
羧甲基纤维素是弱阳离子交换填料,要求使用时的pH值要低于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是低于1个以上pH值单位.在低pH值下,有的不耐酸的杂质蛋白质会变性,届时离心除去,可首先去除一部分杂质蛋白质.
DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料,要求使用时的pH值要高于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是高于1个以上pH值单位.大多数蛋白质的等电点在6.0左右,可以耐受8.0,所以依据pH提高使得某些杂质蛋白质变性的做法多数情况下不可行.
这两种填料的工作pH值不同,但都可以用氯化钠来洗脱.交换基团不同,分离效果也不同,可以先用一种来纯化,得到初步纯化的产物之后再用另一种来纯化.因为有些蛋白质不能耐受酸,所以我建议先用羧甲基纤维素弱阴离子交换层析,再用DEAE纤维素弱阳离子交换层析,产物的纯度比单用一种时更高.
在对蛋白质的破坏方面,弱交换填料比强交换填料好,有的蛋白质用强离子交换来纯化,蛋白质结合再交换之后会损失很多活力,但是弱离子交换则损失的活力较少.但是弱离子交换的分辨率比强离子交换差一些.如果纯化得不好,又有强离子交换的,就试一下吧.lxj341401(站内联系TA)一个是阳离子交换填料,一个是阴离子交换填料,用哪个跟蛋白值的等电点pI还有所用缓冲液的pH有关,pH>pI时带负电荷,蛋白质能吸附到阴离子交换填料,相反的用阳离子交换.所以能不能代替看具体情况了.悦迷008(站内联系TA)Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-15 06:00:21:
这两个填料虽然都是离子交换用的,但一个是弱阴一个是弱阳,效果不同,没有一个能代替另一个的说法.
DEAE纤维素是弱阴离子交换层析填料,要求使用时的pH值要高于目的蛋白质等电点起码0.5个pH值单位,为了达到较好的分离效果,实际使用时最好是高于1个以上pH值单位.大多数蛋白质的等电点在6.0左右,可以耐受8.0,所以依据pH提高使得某些杂质蛋白质变性的做法多数情况下不可行.
这两种填料的工作pH值不同,但都可以用氯化钠来洗脱.交换基团不同,分离效果也不同,可以先用一种来纯化,得到初步纯化的产物之后再用另一种来纯化.因为有些蛋白质不能耐受酸,所以我建议先用羧甲基纤维素弱阴离子交换层析,再用DEAE纤维素弱阳离子交换层析,产物的纯度比单用一种时更高.
在对蛋白质的破坏方面,弱交换填料比强交换填料好,有的蛋白质用强离子交换来纯化,蛋白质结合再交换之后会损失很多活力,但是弱离子交换则损失的活力较少.但是弱离子交换的分辨率比强离子交换差一些.如果纯化得不好,又有强离子交换的,就试一下吧.lxj341401(站内联系TA)一个是阳离子交换填料,一个是阴离子交换填料,用哪个跟蛋白值的等电点pI还有所用缓冲液的pH有关,pH>pI时带负电荷,蛋白质能吸附到阴离子交换填料,相反的用阳离子交换.所以能不能代替看具体情况了.悦迷008(站内联系TA)Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-15 06:00:21:
这两个填料虽然都是离子交换用的,但一个是弱阴一个是弱阳,效果不同,没有一个能代替另一个的说法.